1、ICS 65. 020. 30 B 44 DB14 山西省 由巳 ET圃， 、万 标准 DB 14/T 1942-2019 实验动物中国地鼠微卫星DNA检测方法 Laboratory animal Method for microsatellite markers of Chinese hamster 2019 -12 -01发布2020 -02 -01实施 山西省市场监督管理局 发布 DB14/T 1942-2019 目次 前言. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11 I 范围. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 2 术语和定义. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
3、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 3 抽样. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 4 方法.2 DB14/ T 1942一一2019 II 目IJ1=1 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则编
4、写。 本标准由山西省科学技术厅提出、归口并监督实施。 本标准起草单位:山西医科大学。 本标准主要起草人:宋国华、刘田福、陈朝阳、高继萍、张锐虎、续国强。 DB14/T 1942-2019 实验动物中国地鼠微卫星DNA检测方法 1 范围 本标准规定了实验动物中国地鼠(以下简称实验中国地鼠)遗传检测抽样数量及微卫星DNA检 测方法。 本标准适用于实验中国地鼠品系鉴别、质量控制及遗传组成分析。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2. 1 实验中国地鼠laboratory Chinese hamster 指经人工饲育，对其携带的微生物和寄生虫实行控制，遗传背景明确或者来源清楚，用于科学研究
5、、 教学、生产和检定以及其它科学实验的中国地鼠(Gricetulusgriseus)。 2. 2 近交系中国地自inbred strain Chinese hamster 以全同胞或亲子交配方式繁殖20代以上的中国地鼠，近交系数达98.6%以上。 2.3 封闭群中国地鼠closed colony Chinese hamster 以非近亲交配方式繁殖中国地鼠，在不从外部引入新个体的条件下，至少连续繁殖4代以上。 2.4 微卫星DNAmicrosate11ite DNA 是指基因组中由16个碱基组成的串联重复序列。不同个体的重复数不同而形成了微卫星DNA 的多态性。 3 抽样 对j丘交系中国地鼠抽
6、样数量不做要求。每个封闭群随机抽取非同窝成年实验中国地吕立，雌雄各半。 采样数量按表l进行。 DB14/T 1942-2019 表1封闭群实验中国地鼠遗传检测抽样要求 群体数量(只)抽样数量(只) 少于100?15 大于100?30 4 方法 4. 1 采样 观察动物外观，核对编号，中国地鼠取0.5cm尾尖组织或眼眶静脉丛采血，-20C低温保存。 4. 2 微卫星位点的选择 各微卫星位点的名称、引物序列、等位基因数、PCR反应的退火温度见表20PCR引物的5端用 FAM荧光染料进行标记。近交系中国地鼠在表2中选择10个微卫星位点，封闭群中国地鼠在表2中选 择15个微卫星位点。 表2中国地鼠微卫
7、星佳点 位点引物序列退火温度(oC)片段大小最大等位基因数 F:AGGCTGCTTCCTAAACCCAT Chm35 51 354-391 4 R:CTGGGAAGGCTGAACTCAAG F:TCTGTGTGTCTGTGAATGCG Chm93 58 242-299 7 R:GGATGTAAGATGGCTCCGAA F:CATCTGGGCTTTCAATGGAT Chm147 58 233-292 9 R:GCTCCCTAAATAACCCCCAA F:AGGGGAGATCTTGGGTCAGT Chm79 51 270-355 5 R:AACATGGAGGAGCACAAACC F:GATAGGA
8、GGGAGCAAAAGGG Chm120 58 376-432 12 R:CCTGAGAGCCTCAGAGCAGT F:TCTTCCCTTCACAACCCAAG Chm162 58 167-214 12 R:AGCAGTGCCCTTTGAAACAT Ch日110F:GGCTGGTGATTTCAATGGTT 59 217-357 5 2 DB14/T 1942-2019 R:GTTCTTAATGGATCTACCCTGGGACC F:CAATGGCTGCTAAGAGAGGG Chm108 59 392-471 5 R:GTTCTTTCCCACTCACAATTTTCCTTG F:TACTCCTGTC
9、TCCACCTCCC Chm115 59 171-220 6 R:GTTCTTTCTGGGGGATGTATGCTCTC F:CAGATGCCCAAACTCTCTCC Chm124 59 355-404 4 R:GTTCTTGTCACCCCATGGACTACACC F:TGCCCACATACATGACACAA Chm134 59 383-428 5 R:GTTCTTTCCCAACACCCTCTTCTGAC F:GACCCCATTCGTAAACCAGA Chm14 59 259-316 4 R:GTTCTTCCCCACAGTCAGCCCTATATT F:GCAGCTGGTTTTGAGCTACC C
10、hm140 60 168-205 7 R:GTTCTTTGTTTGATCACTGGAACCCA F:AAAGGCCTTGAGGTGGAGTT Chm48 60 369-448 10 R:GTTCTTGAGGTAGGCAGGGACTGACA F:AGTTTGATGATCCCCAGCAC Chm54 59 326-367 6 R:GTTCTTCTACCCCTCTCAGCAACCTG F:GACAGATCCCGACCCATTTA Chm9 59 118-145 5 R:GTTCTTGTCCTGAGCAAGTCCAGAGC F:GCAGAAGCACAAACCAACAA Chm91 59 104-145
11、 7 R:GTTCTTAGGCCAAGCTCTTCTCTTCC 4.3 PCR 扩1曾 4.3.1 提取基因组DNA 用苯盼氯仿法或试剂盒提取基因组DNA。 4.3.2 PCR扩增体系 PCR扩增总体积为10L，其中DNA(20 ng /L) 0.8L， 10 x Buffer 1.0L， Mg2+( 25 mmo1!L) 0.8 L， d NTP( 2.5mmol / L) 0.8L，上、下游引物(1 pmol/ L)各0.1!lL，Taq DNA聚合酶(5U /L) 0.1 L， dd H20 6.3L。 PCR扩增程序:94 0C预变性 5min; 94 0C变性 30s，退火(退火温度
12、见表2)30 s, 72 Oc延伸45 s, 35个循环72Oc延伸20mino扩增产物40C保存。 3 DB14/T 1942-2019 4.3.3 PCR产物的检测 PCR产物，经1.5%的琼脂糖凝胶电泳以及凝胶成像系统拍照检测扩增结果。 4.3.4 扩增产物的STR扫描 扩增产物经过琼脂糖凝胶电泳检测确保扩增出目的片断后，选择以FAM蓝色荧光标i己的扩增产物， 取lL上样进行STR扫描。 4.4 STR扫描结果的要IJ卖与统计分析 4.4.1 STR扫描结果的判读 扫描结果出现两种波形:一种为纯合基因型，只有一个主波:另一种为杂合基因型，有两个主波。 同时，根据软件读出波峰处的扩增产物的
13、碱基对数。由基因分型软件读出每个样本在每个做卫星位点的 扩增片断大小。每个位点的等位基因根据扩增片断从小到大JII员序排列纪录为a，b, c, d等。 4.4.2 运用群体遗传分析软件对数据进行统计分析 将所有样本的每个微卫星位点的基因型以ab，bb等形式输入群体遗传分析软件的数据文件，计算 样品在各微卫星位点上的基因频率、平均观察等位基因数、平均有效等位基因数(Ne)、平均杂合度 (H)等。 4.5 结果判定 4.5.1 近交系中国地鼠 所有样品检测位点的等位基因都符合品系的特征，没有新的等位基因出现为合格的近交系中国地 鼠。否则判为不合格。 4.5.2 封闭群中国地鼠 群体内遗传变异采用平
14、均杂合度指标或群体平衡状态方法进行评价。平均杂合度在O.5O.7时，且 期望杂合度与现测杂合度经卡方检验无明显差异时，群体为合格的封闭群中国地鼠群体。 或者，首先得到各个位点上各基因频率、基因型频率的实际值，然后可计算出基因频率和基因型频 P 85 DB37 山 东 省地方标准 DB37/T 302一-2002 种猪场建设标准 Construction criterions for breeding pig fann 2002-01-21发布2002-01-21实施 山东省质量技术监督局发布 0037 rr 3t02-2C掬2 前 山东省养猪业已逐渐由过去传统的生产方式向规模化、专业化生产发展
15、，新品种、新技术、新工艺 大量推广使用。为提高规模猪场的综合生产水平、技术水平和经济放益，根据山东省规模化猪场的生产 现状与猪场建设经验，特提出本标准。 本标准由山东省质量技术监督局提出。 本标准由山东农业大学、莱阳农学院和山东省畜牧兽医总站起草。 本标准起草人:林海、米春阳、曲万文、田夫林。 DB37rr 302-2002 种猪场建设标准 1 范围 本标准规定了种猪场建设规模、选址与建场、场区规划与布局、工艺设备、猪舍建筑、配套设施、 防疫与环境保护等要求。 本标准适用于新建及改建、扩建的种猪场。 2 规范性引用文件 F列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，
16、其随后所有的 修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GBJ 39-1990村镇建筑设计防火规范。 GB 5749生活饮用水卫生标准 GB 5084-1992农田灌溉水质标准 GB 7959-87粪便无害化卫生标准 GB 11607-1989油业水质标准 GB 14554恶臭污染物排放标准 GB 16548-1996畜禽病害肉尸及其产品无害化规程 GB 16549畜禽产地检疫规范 GB/ T 17824.3-1999中、小型集约化养猪场设备 GB/T 17824.
17、4-1999中、小型集约化养猪场环境参数及环境管理 GB 15618-1995士壤环境质量标准 DB37/T 304-2002规模化猪场生产技术规程 3 定义 本标准采用下列定义。 3.1 种猪场 从事猪的品种培育、选育和生产经营，并取得国家种畜禽生产经营许可证的猪场。 4要求 4. 1 建设规模要求 4. 1. 1 建场要求 种猪场的建设规模应符合国家制定的猪的良种繁育体系总体规划布局要求和猪的品种繁育体系结 构需要，并符合周边地区种猪市场需求量及社会经济发展状况。 4.1.2 建筑规模要求 种猪场的建设规模应符合表l的规定 表1种猪场建设规模(头) 大型种猪场| 中型种猪场小型种猪场 n
18、AUn numnu au-A - nu-nu nu-nu nd-户。 AUEAU AU-AU 吨。-no 价一忡 qA-nd 0837厅302-2002 4.2 选址与建场条件 场址选择必须符合以F基本条件: 4. 2. 1 符合国家畜牧行政主管部门制定的良种繁育体系规划布局要求。 4.2.2 符合当地士地利用发展规划和村镇建设发展规划的要求。 4.2.3 场址地势高燥、平坦，在丘陵山地建场地应尽量选择阳坡，坡度不得超过20 0 。 4.2.4 场民士壤质量符合GB15618-1995土壤环境质量标准的规定。 4.2.5 猪场水源充足，取用方便，便于防护，水质符合GB5749的规定。 4.2.
19、6 交通便利，电力可靠，粪尿污水能就地处理或利用。 4.2.7 满足建设工程需要的水文地质和工程地质条件。 4.2.8 场址根据当地常年主导风向，位于居民区及公共建筑群的-r风向处。 4.2.9 场界距离交通干线不少于1000米:距居民居住区和其它畜牧场不少于2000米。 4.2.10 以下地段或地区不得建场:水保护区、旅游区、自然保护区、环境污染严重畜禽疫病常发区及 山谷洼地等易受洪涝威胁的地段。 4.3 建筑与用地 4.3.1 建筑紧凑，在满足当前生产需要的同时，用考虑将来发展的可能性。 4.3.2 猪舍总建筑面积按每饲养一头基础母猪需15m2-20m2计算，猪场的其它辅助建筑总面积按每饲
20、养 一头基础母猪需2m-3m2计算。 4.3.3 猪场的场区Ili地总面积按每饲养一头基础母猪需60m2-70m2计算，不同规模种猪场占地面积的调 整系数为:大刑场0.8-0.9;中型场1.0;小型场1.1-1. 20 4.4 规划与布局 4.4.1 猪场建筑物布置 猪场建筑设施应按管理!天、生产阪丰IJ隔离区三个功能区分区布置，各功能区之间界限分明，联系方 便。管理区所位于生产x.主风向的上风向及地势较高处，隔离区应位于场厌主风向的F风向及地势较低 处。 管理庆内包括c作人员的生活设施、猪场办公设施、与外界接触密切的生产辅助设施(饲料库、军 阵:等);生产庆内主要包括种公猪舍、母猪舍、产房、
21、保育舍、生校舍、育成舍、测定舍及有关生产辅 助设施:隔离区包括兽医室、隔离猪舍、病猪焚烧处理和粪便污水处理设施。 4.4.2 道路设置 猪场与外界应有专用道路相遥远。场内道路分净道与污道，两者应严格分开，不得交叉与混用. 4.5 工艺与设施 4. 5. 1 确定仁艺方案的原则 4.5. 1. 1 适用于各类种猪选育、培育的技术要求。 4.5. 1.2 有利于种猪场的防疫卫生要求。 4.5.1.3 有利于粪尿污水减量化、无害化处理的技术要求和环境保护要求。 4.5.1.4有利于提高劳动生产率。 4.5.2 饲养与管理工艺 种猪饲养应根据全年生产出栏计划总头数，母猪分周或分旬分批配种分娩，对猪群按
22、不同阶段分批 饲养，做到全进全出，提高劳动生产率和猪栏利用率。 4.5.3 词养设施配置的原则 4.5.3.1 设施必须满足种猪选育与培育技术的要求 4.5.3.2 经济实用、便于清洗消毒、安全卫生. 4.5.3.3 有利于减少猪只的应激反应，降低发病率。 4.5.3.4 电子控制舍内环境，便于观察和处理猪群。 4.5.4 饲养设施 2 0837厅302-2002 4.5.4. 1 分娩母猪来用产床限位饲养。保育猪应采用网、床饲养设施。 4.5.4.2 采用人t:或机械饲喂设施，自动饮水设施，有关设备性能不低于GB/T17824. 3-1999的规定。 4.5.4.3 猪舍沿长轴方向设置粪尿沟
23、，粪便清除采用人L或机械清粪，不宜采用水冲式清粪。 4. 6 猪舍建筑 各类猪舍应采用轻钢结构成砖混结构。 4. 6. 1 猪舍形式 猪舍建筑应根据当地自然气候条件，因地制宜采用半开放式或有窗式封闭猪舍。 猪舍的犀顶形式应采用双坡式屋顶。猪舍挣高度不低于2.5m-2.7m。 4.6.2 猪舍内平面布置 猪栏应沿猪舍长轴方向平.单列或多列布置。猪舍两端和中间应设置横向通道。 4.6.3 猪舍地面 猪舍内应采用硬化地面，地面应向粪尿沟处作1%-3%的倾斜，地面结实、易于冲刷，能耐受各种形 式的消毒。 4.6.4 猪舍方位 猪舍朝向和间距须满足日照、通风、防火、防疫的要求，猪舍氏轴朝向以南向或南偏东
24、15 0 以内为 宜:每相邻二猪舍纵墙间距控制在7m-10m为宜。每相邻二猪舍端墙间距不少于9m猪舍距围墙不少于10m。 4.6. 5 猪舍内的环境参数和l控制服符合GB/T17824.4-1999的规定。 4.6.6 不同猪群的饲养密度应符合表2的规定。 表2猪群的饲养密度 猪群类别每栏饲养头数每头Iiy猪栏面积 (m2) 种公猪7.5-9.0 娃据母猪 1-:2 4-5 空怀、娃振母猪4-5 2.0-2.5 后备猪4-6 1. 5-2. 0 哺乳母猪3.8-4.2 断奶仔猪10 0.38-0.42 测定公、母猪4-5 L 8-2.2 生i(猪8-10 0.6-0.9 育成猪8-10 0.8-1. 2 配种栏7.5-9.0 4.6.7 饲料供应 种猪场根据育种猪群营养需要加工全价配合饲料，其配套的词料加工厂生产能力不应低于表3之规 定
