1、空气中微生物数量检测空气中微生物数量检测.11.21第1页n n一、试验目标n n二、试验原理n n三、试验步骤n n四、结果计算n n五、结果评价第2页一、试验目标和意义一、试验目标和意义n n掌握检测和计数空气中微生物基本方法n n掌握无菌操作技术和微生物试验基本操作n n学习对室内空气进行初步微生物学评价第3页试验意义试验意义n n空气中细菌总数常作为室内空气质量和空气受到微生物性污染程度指标。n n用于医院、公共场所等空气质量评价第4页二、试验原理二、试验原理n n1 1：自然沉降法（沉降平板法）：自然沉降法（沉降平板法）n n依据空气中携有微生物气溶胶粒子在地心引力作依据空气中携有微
2、生物气溶胶粒子在地心引力作用下，以垂直自然方式沉降到琼脂培养基上，经用下，以垂直自然方式沉降到琼脂培养基上，经过过24h24h，3737温箱培养计算出菌落数。温箱培养计算出菌落数。n n特点：此法简单方便，但稳定性差，直径特点：此法简单方便，但稳定性差，直径1 15m5m粒子在粒子在5min5min中内沉降距离有限，使小粒子采集率中内沉降距离有限，使小粒子采集率较低。较低。第5页n n2.2.撞击法撞击法n nAndersonAnderson采样器原理：多级筛孔型采样器采样器原理：多级筛孔型采样器 由由6 6个带有微细针孔金属撞击盘组成，盘下放置有个带有微细针孔金属撞击盘组成，盘下放置有培养基
3、平皿，每个圆盘上有培养基平皿，每个圆盘上有400400个环形排列小孔，个环形排列小孔，由上到下孔径逐步减小。气流从顶罩进第一级，由上到下孔径逐步减小。气流从顶罩进第一级，较小粒子会因为动量不足随气流绕过平皿进入下较小粒子会因为动量不足随气流绕过平皿进入下一级。经过一级。经过6 6次撞击后，可把绝大部分微生物采下。次撞击后，可把绝大部分微生物采下。第6页Anderson采样器（采样器（FA-1型）型）第7页各级撞击盘捕捉粒子范围及孔径大小各级撞击盘捕捉粒子范围及孔径大小n n：7m 7m 孔径孔径1.181.18n n：4.77m 4.77m 孔径孔径0.910.91n n：3.34.7m 3.
4、34.7m 孔径孔径0.710.71n n：2.13.3m 2.13.3m 孔径孔径0.530.53n n：1.12.1m 1.12.1m 孔径孔径0.340.34n n：0.651.1m 0.651.1m 孔径孔径0.250.25第8页各种粒径大小菌落易沉降部位及意义各种粒径大小菌落易沉降部位及意义第9页n n特点 a.采集粒谱范围广，普通在0.220m以上；b.采样效率高，逃逸少 c.微生物存活率高第10页n n3.滤过法：使一定量空气经过吸附剂（灭菌生理盐水），然后培养吸附剂中细菌，计算出菌落数。n n4.液体撞击法：和固体撞击式采样器一样，是利用喷射气流方式将空气中微生物粒子采集在小体
5、积液体中，适合用于高浓度空气微生物采样。第11页三、试验步骤三、试验步骤n n1.自然沉降法 配制琼脂培养基（已做）培养皿暴露空气中5min/10min 37温箱培养24h 计数和结果评价第12页n n采样布点标准采样布点标准a.a.依据室内面积进行对角线或者梅花式均匀布点，依据室内面积进行对角线或者梅花式均匀布点，小于小于50m50m2 2房间应设房间应设3 3个点，个点，5050100m100m2 2设设3 35 5个；个；100m100m2 2以上最少以上最少5 5个点个点b.b.采样高度采样高度 和人呼吸高度一致（和人呼吸高度一致（1.21.21.5m1.5m）c.c.采样点应避开风口
6、，离墙壁距离应大于采样点应避开风口，离墙壁距离应大于0.5m,0.5m,采样采样时关闭门窗，降低人员走动时关闭门窗，降低人员走动第13页n n2.2.撞击法撞击法 调整采样器高度为呼吸带高度于调整采样器高度为呼吸带高度于1.21.21.5m1.5m 将平皿依次放入圆盘，固定并做好标识将平皿依次放入圆盘，固定并做好标识 接通电源，开打电源开关，调整流量到接通电源，开打电源开关，调整流量到28.3L/min 28.3L/min 采样采样5min/10min5min/10min后，取出平皿，经过后，取出平皿，经过24h24h，3737培养，培养，计数计数第14页分组：4个同学一组，分别采取自然沉降法
7、和Anderson采样器，采样时间设为5min和10min，比较两种采样方法结果。注意事项：整个过程注意无菌操作。第15页四、结果计算四、结果计算n n1.1.自然沉降法自然沉降法n n依据奥梅梁斯基提议，面积为依据奥梅梁斯基提议，面积为100cm100cm2 2平板培养基，暴露于平板培养基，暴露于空气中空气中5min5min，于，于3737温箱培养温箱培养24h24h后所生长菌落数相当于后所生长菌落数相当于10L10L空气中细菌数空气中细菌数n n空气中细菌数（空气中细菌数（cfu/m cfu/m 3 3）=1000(100/A)(5/t)=1000(100/A)(5/t)(1/10)N(1
8、/10)Nn n =50000N/(AT)=50000N/(AT)n nA-A-平板面积（平板面积（cmcm2 2）T-T-暴露时间（暴露时间（minmin）n nN-N-平均菌落数（平均菌落数（cfu/cfu/皿）皿）第16页n n2.2.撞击法撞击法n n空气含菌量空气含菌量(cfu/m(cfu/m3)3)=六级采样板总菌数六级采样板总菌数（cfucfu）28.328.3（L/minL/min）采样时间（采样时间（minmin）1000 1000n n计算空气中微生物大小分布：计算空气中微生物大小分布：各级微生物粒子数各级微生物粒子数=该级菌落数该级菌落数/六级总菌落数六级总菌落数 第17
9、页五、结果评价五、结果评价n n空气微生物卫生标准，是以细菌作为标准空气微生物卫生标准，是以细菌作为标准n n细菌选取指标是菌落总数，表示方法为细菌选取指标是菌落总数，表示方法为cfu/cfu/皿或者皿或者cfu/mcfu/m3 3 我国现行标准是依据空气中实测细菌数和流行病学我国现行标准是依据空气中实测细菌数和流行病学观察结果为主要依据。观察结果为主要依据。第18页n n室内空气质量标准（GB/T18883-）n n2500cfu/m3第19页公共场所空气卫生标准公共场所空气卫生标准n n图书馆、阅览室空气卫生标准：空气细菌总数图书馆、阅览室空气卫生标准：空气细菌总数2500cfu/m250
10、0cfu/m3 3（撞击式），或（撞击式），或3030个个/皿（沉降式）皿（沉降式）n n娱乐场所卫生标准：空气娱乐场所卫生标准：空气4000cfu/m4000cfu/m3 3n n幼托机构室内卫生标准：空气细菌菌落数应幼托机构室内卫生标准：空气细菌菌落数应2500cfu/cm2500cfu/cm3 3（沉降法）（沉降法）第20页医院消毒卫生标准（医院消毒卫生标准（GB159821995）第21页1.对两种方法结果比较？2.依据Anderson采样器试验结果，计算空气中微生物大小分布：以各级菌落数占六级总菌落数百分比表示。第22页两种方法比较两种方法比较n n1.1.沉降法测定菌落总数要多，在
11、试验条件下比撞击法多沉降法测定菌落总数要多，在试验条件下比撞击法多24.624.6。n n2.2.小颗粒含菌粒子在空气中稳定，不易沉降或者漂浮，撞小颗粒含菌粒子在空气中稳定，不易沉降或者漂浮，撞击法比沉降法更易采集到小粒子。击法比沉降法更易采集到小粒子。n n3.3.沉降法结果不稳定，轻易受采样条件影响。沉降法结果不稳定，轻易受采样条件影响。第23页影响原因影响原因n n1.温度对细菌数量影响较大，温度越低，细菌数越少。n n2.气流，不但能够把室外细菌带入室内，也会将地面、墙壁含菌粒子扬起。n n3.日光，波长为254纳米紫外线光含有杀菌作用n n4.湿度，湿度过低，繁殖体易趋向死亡。第24页
