1、实验室方法验证 目录 验证目的及实验室方法主要类别 各类别方法验证的项目要求 验证项目介绍和举例 方法验证的目的 证明一定条件下的实验方法能达到实验目 的 实验条件 人员 仪器 样品（结果范围，成分）、试剂 方法 实验目的 鉴别、定量、限度、杂质、成分 实验方法的类别 鉴别试验： 杂质含量（定量） 控制杂质限度（定性） 成分含量（定量） 验证项目要求验证项目要求 项目 鉴别试 验 杂质试验 含量试验 定量定性 项目 鉴别试 验 杂质试验 含量试验 定量定性 准确度准确度 Accuracy 精密度精密度 Precision 重复性重复性 Repeatabil. 中间精密度中间精密度 Interm
2、. Preci. 专属性专属性 Specificity 检测限检测限 Detection Limi. 定量限定量限 Quantitation Limi. 线性线性 Linearity 范围范围 Range 耐用性耐用性 Robust 专属性研究 证明对目标物质有专一性不会受样品中可 能存在的其他物质（结构类似物、降解 物、其他）干扰。 研究方法: 与结构类似物直接对比法 （鉴别试验） 回收法 分离法（计算色谱分辨率） 间接法： 进行方法比对 在极端条件下，促使形成降解物，然后进行峰纯度 检查。 专属性研究 流感疫苗中卵清蛋白含量检测 疫苗处方中标准量卵清蛋白 不加卵清蛋白的疫苗处方溶液作为空白
3、 回收率：95-105% 流感疫苗中生育酚含量检测 产品中加入结构类似物，生育酚琥珀酸，生育 酚醌 通过方法分离后，显示分离度1 线性线性 检查目标物质浓度与检测结果间的相关性 至少做5各稀释浓度 检查、报告 目测、相关系数（r）、截距、斜率、R2 接受标准： R 0.99 y = 0,0222x + 0,0138 R2 = 0,9999 0,0 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 7,0 8,0 9,0 10,0 050100150200250300350 Tocopherol Quinone 礸礸/ml Integrated Peak Area mAU/min 范围范围 研究确
4、定获得可靠结果（达到一定精密 度，准确度和线性）的检测浓度范围 通过线性，准确性和重复性研究结果分 析确定，该方法的适用检测浓度范围。 可接受范围 含量检测方法：80120 含量均匀度检测方法：70 130 溶出度含量检测方法：检查范围的+/- 20% 杂质含量方法：限度的120 准确度和精密度的特征准确度和精密度的特征 准确度 方法： 直接用标准品（原辅料） 标准品加入法 （药品， 杂质） 方法比对 至少，3个不同浓度，3个 重复 接受标准：根据实际情况 Sample preparation Theoretical ovalbumin concentration (ng/ml) Measur
5、ed ovalbumin concentration (ng/ml) Recovery (%) B/Joh 200123-2 19 B/Joh 200123-2 + 5 ng/ml 24 20 83 B/Joh 200123-2 + 2 g/ml 1980 1773 90 A/Pan 20010317-KF 31 A/Pan 20010317-KF + 30 ng/ml 60 54 90 A/Pan 20010317-KF + 2 g/ml 1992 2070 104 A/NewCal 20010419 30 A/NewCal 20010419 + 30 ng/ml 59 57 97 A/Ne
6、wCal 20010419 + 2 g/ml 1991 1882 95 SSW 200107 14 SSW 200107 + 30 g/ml 43 38 88 SSW 200107 + 2 g/ml 1832 1483 81 测量系统分析 测量系统分析 精密度重复性 在同一实验系统下，对同一样品进行至少6次重 复，或至少3个不同浓度样品各3次重复 报告：SD, RSD，可信限 接受标准：根据实验方法的不同而不同 Table 4: Summary of the repeatability of the diluted and undiluted ovalbumin assay, n=6. Und
7、iluted sample Dilution factor Ovalbumin concentration Mean value (ng/ml) SDRSD (%) B/Joh 200123-2 1:1 17 1.41 8.32 SSW 2001071:1 100.000.00 B/Shan 20030115 1:2 50.499.80 A/NewCal 20010419 1:2 272.7310.12 A/NewCal 20030113 1:3 70.7510.65 A/Pan 20010317-KF 1:2 312.437.85 A/Pan 20030116 1:5 13 1.85 14.27 FB 18765 1:2 30.000.00 Conclusion: The repeatability of the analysis of ovalbumin was satisfactory (RSD 100 47.4 89.5 结果发现： 温度对实验结果影响很大 试剂体积对结果有影响 供试样品量（0.1-0.6ml）对结果没有影响 所有：每天必须做校正曲线 可靠性 甲醛含量 文件 验证方案，报告范例 参考文献 ICH Guideline Q2 中国药典2005(二部)，附录XIX 谢 谢谢 谢 Wang_xu
