1、.实验一 薄层板的制备、活度测定及应用1. 目的要求1.1 掌握薄层板的制备及薄层层析的操作方法1.2 掌握吸附剂活度测定的原理及方法1.3应用薄层层析法检测以中草药化学成分2实验原理2.1薄层层析是一种微量、快速的层析方法。它不仅可以用于纯物质的鉴定，也可用于混合物的分离、提纯及含量的测定。还可以通过薄层层析来摸索和确定柱层析时的洗脱条件。根据分离的原理不同，薄层层析可以分为两类：用吸附剂铺成的薄层所进行的层析为吸附薄层层析；用纤维素粉、硅胶、硅藻土为支持剂铺成的薄层，属于分配薄层层析。薄层层析中以吸附簿层为多用，吸附薄层中常用的吸附剂为氧化销和硅胶。2.2 吸附簿层主要是利用吸附剂对样品中
2、各成分吸附能力不同，及展开剂对它们的解吸附能力的小同，使各成分达到分离。吸附作用主要由于物体表面作用力、氢键、络合、静电引力、范德华力等产生。吸附强度决定于吸附剂的吸附能力，还受被吸附成分的性质影响，更与展开剂的性质有关。2.3分配簿层层析的原理是，用极性溶剂吸附在同体支持剂上所形成的混合物，铺成簿层（或装柱），然后活化、点样（或上样），再用极性较弱的展开剂（或洗脱剂）进行展开。在展开过程中，各成分在固定相和流动相之间作连续不断的分配。由于各成分在两相间的分配系数不同，因而可以达到相互分离的目的。2. 4由于化合物的极性不同，吸附能力不相同，在展开剂上移动，进行不同程度的解析，根据原点至主斑点
3、中心及展开剂前沿的距离，计算比移值(Rf)：化合物的吸附能力与它们的极性成正比，具有较大极性的化合物吸附较强，因此Rf值较小。在给定的条件下（吸附剂、展开剂、板层厚度等），化合物移动的距离和展开剂移动的距离之比是一定的，即Rf 值是化合物的物理常数，其大小只与化合物本身的结构有关，因此可以根据Rf值鉴别化合物2.5薄层层析可适用小量样品（几到几十微克甚至）的分离：也可用于多达500mg样品的分离，是近代有机化学中用于定性、定量的一种重要手段。特别适用于那些挥发性小的化合物，以及在高温下易发生化学变化而不能用气相色谱分析的物质。3 实验材料3.1 材料：硅胶GF254，硅胶（H），羧甲基纤维素钠
4、，玻璃片，市售薄层板3.2 溶剂：石油醚，乙酸乙酯，二乙胺等 4 实验步骤4.1硅胶(H)羧甲基纤维钠(CMC-Na)薄层板的制备取0.8%羧甲基纤维纳10ml，倒入烧杯中，然后逐步加入薄层层析用硅胶3.3克，不断振摇成均匀的稀糊，把两块载玻片面对面结合在一起，这样每片只有一面与硅胶糊接触，使薄片浸入硅胶稀糊中，然后慢慢取出，分开二块薄片，将未粘附硅胶糊的那一面水平放在一张清洁的纸上，让其自然阴干，100下烘30分钟。冷后于干燥器内备用。未消耗的硅胶稀糊可贮存在广口瓶内，以供再用。4.2 吸附剂的活度测定一般选用三种染料的薄层层析法进行测定，即用0.01%二甲基黄（Dimethy-yellow
5、. P-Dimethylaminoazobenzene）。苏丹红（Sudan ），靛酚蓝（Indophenol blue 4-Tapnthoquinone-4-dimethyl aminoaniline）的苯溶液各10l点滴于硅胶H薄层上，以苯为展开剂，展开10cm（约20分钟），观察染料分离情况。4.3 薄层层析的应用4.3.1 湖北贝母生物碱成分的TLC检识分别用毛细管吸取湖北贝母总生物碱氯仿溶液点滴在硅胶CMC-Na薄层上，以C6H5-EtoAc-NHEt2(6：4：1)的比例配成展开剂展开，待展开剂展开至离薄板上端边缘约1cm时，取出薄板自然吹干，然后喷洒显色剂改良碘化铋钾喷雾，晾干，
6、观察并记录TLC分离结果。4.3.2 丹参色素的TLC检识分别用毛细管吸取丹参乙醚提取液点滴在硅胶CMC-Na薄层上，以石油醚-醋酸乙酯 (9：1)的比例配成展开剂展开，待展开剂展开至离薄板上端边缘约1cm时，取出薄板自然吹干，然后喷洒显色剂改良碘化铋钾喷雾，晾干，观察并记录TLC分离结果。5 实验结果及讨论5.1 实验制备的硅胶CMC-Na薄层表面均匀，无明显气泡出现，但活化后触碰薄层时，容易出现掉粉现象，粘合效果欠佳，这表明薄层板的质量仍有待提高。5.2 对薄层板进行活度测试，观察薄板，可以看到拖尾现象，且薄板经溶剂浸泡后有少许地方吸附剂出现明显脱落现象，这可能是由于羧甲基纤维钠加入的量不
7、够引起的。5.3用0.01%二甲基黄、苏丹红，靛酚蓝的苯溶液各10l点滴于硅胶H薄层上，以苯为展开剂，展开后，三种染料分离明显：靛酚蓝斑点接近于起始线，二甲基黄斑点靠近薄层中间位置，苏丹红斑点则于两种染料斑点之间。5.4 取硅胶Gf高效板对湖北贝母生物碱成分进行检识，在展开剂C6H5-EtoAc-NHEt2(6:4：1)展开之后，吹干，观察薄层板无明显现象，放在紫外灯下明显看到样品点接近原点，无展开现象，而喷洒显色剂之后，原点上的两个样品变成黑色。换成展开剂为C6H5-EtoAc-NHEt2 (3：4：1)，其极性提高，样品点有稍微的上升，说明样品中生物碱的极性较高，需要换成极性高的展开剂才能得到好的分离效果。5.5 取硅胶Gf高效板对丹参色素进行检识，在展开剂石油醚-醋酸乙酯(9：1)展开之后，吹干，观察到簿层板上距离原点线约0.5cm处有明显的点，而且点后面出现成一条线状的拖尾现象，展开剂的极性过低，对样品的展开效果欠佳，样品点上升的高度过低。;.
