1、 DBS22 吉 林 省 地 方 标 准 DBS22/0012012 食品安全地方标准 食品中D-异抗坏血酸的测定 高效液相色谱法 2012 - 12 - 10发布 2013 - 01 - 01实施吉林省卫生厅 发 布 DBS22/0012012 I 前 言 本标准的附录 A 为资料性附录。 本标准起草单位：吉林省产品质量监督检验院。 本标准主要起草人：李刚、闫林、王颖、毛燕、冷喜芳、陈雪、李丹、张清、赵文荣。 DBS22/0012012 1 食品安全地方标准 食品中D-异抗坏血酸的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了食品中D-异抗坏血酸测定的高效液相色谱法。 本标准适用于饮料、蔬菜水
2、果制品、婴幼儿食品、烘培食品、熟肉制品等食品中D-异抗坏血酸的测定。 本标准方法的检出限为1.0 mg/kg。 2 原理 试样中D-异抗坏血酸用溶剂提取、稀释后，经液相色谱法亲水作用色谱（hydrophilic interaction chromatography, HILIC色谱）柱分离，紫外检测器检测，外标法定量。 3 试剂和材料 除特殊说明外，本标准所用试剂均为分析纯，水为一级水，符合GB/T 6682中用水规定。 3.1 D-异抗坏血酸，CAS号：89-65-6，(含量99.7 %)。 3.2 乙腈（色谱纯）。 3.3 乙腈。 3.4 磷酸。 3.5 0.1 %磷酸水溶液：吸取磷酸 1
3、 mL，加一级水定容至1000 mL。 3.6 流动相：精密吸取 0.1 %磷酸水溶液 100 mL，加色谱纯乙腈定容至1000 mL。 3.7 D-异抗坏血酸标准溶液的制备（应现配现用）：精密称取 D-异抗坏血酸标准品 100 mg于 100 mL棕色容量瓶中，加 0.1 %磷酸水溶液定容至刻度，得 D-异抗坏血酸浓度为 1 mg/mL的标准溶液；精密吸取 D-异抗坏血酸标准溶液 1mL、2 mL、5 mL、10 mL、20 mL 于 100 mL棕色容量瓶中，加流动相稀释并定容至刻度，得浓度为 10 g/mL、20 g/mL、50 g/mL、100 g/mL、200 g/mL的 D-异抗坏
4、血酸的系列标准溶液。取此系列标准溶液适量，用 0.45 m一次性微孔滤膜过滤至 2 mL 进样瓶中，待测。 4 仪器和设备 4.1 液相色谱仪：配紫外检测器。 4.2 亲水作用（HILIC）色谱柱：250 mm4.6 mm，5 m，10 nm 或性能相当的其他型号色谱柱。 4.3 电子分析天平：感量0.1 mg。 4.4 匀浆机。 4.5 离心机，50 mL，4000 r/min。 4.6 超声波清洗器。 4.7 0.45 m 一次性微孔滤膜，水相。 DBS22/0012012 2 4.8 0.45 m 一次性微孔滤膜，有机相。 5 样品处理 5.1 条件 检验过程应在避光条件下快速进行。 5
5、.2 液体试样 准确称取试样5 g，精确至0.001 g，置于50 mL容量瓶中，加流动相适量，混匀后，加流动相定容至刻度。充分振荡混匀后，取此试样溶液适量，用0.45 m一次性微孔滤膜过滤至2 mL进样瓶中，待测。含二氧化碳气体的汽水、可乐等饮料样品需先超声振荡5 min，驱除气体后再取样、测定。 5.3 水溶性固体试样 准确称取试样5 g，精确至0.001 g，置于50 mL容量瓶中，加适量0.1 %磷酸水溶液至试样溶解，充分振荡，加流动相定容至刻度。此试样溶液充分振荡混匀后，用0.45 m一次性微孔滤膜过滤至2 mL进样瓶中，待测。 5.4 蔬菜、水果及其罐头制品 取有代表性的部分匀浆后
6、，称取试样12.5 g，精确至0.001 g，置于250 mL锥形瓶中，加15 mL0.1 %磷酸水溶液，超声振荡提取5 min，转移全部提取液至50 mL离心管中，4000 r/min下离心10 min。离心后的上清液转移至50 mL容量瓶中，用约20 mL0.1 %磷酸水溶液分2次清洗沉淀，收集上清液至同一50 mL容量瓶，加流动相定容至刻度。此试样溶液充分振荡混匀后，用0.45 m一次性微孔滤膜过滤至2 mL进样瓶中，待测。 5.5 水不溶性固体试样 准确称取试样12.5 g，精确至0.001 g，置于250 mL锥形瓶中，精确加入0.1 %磷酸水溶液50 mL，匀浆后，在4000 r/
7、min下离心10 min。取上清液10 mL，置于25 mL容量瓶中，加流动相定容至刻度。此试样溶液充分振荡混匀后，用0.45 m一次性微孔滤膜过滤至2 mL进样瓶中，待测。 6 测定 6.1 测定方法 精密吸取试样和标准品溶液，按规定色谱条件分别进样20 L，记录色谱图。以D-异抗坏血酸保留时间定性，外标法峰面积定量。 6.2 高效液相色谱参考条件 亲水作用（HILIC）色谱柱：2504.6 mm，5 m，或性能相当的其他型号色谱柱； 检测波长：245 nm； 流动相：0.1 %磷酸溶液+乙腈=10+90； 流速：1.0 mL/min； 进样体积：20 L； 柱温：40 。 DBS22/00
8、12012 3 7 结果计算 结果按式(1)计算： 10001000mFVCX.(1) 式中： X试样中D-异抗坏血酸含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； C从色谱工作站中读出试液中D-异抗坏血酸的浓度，单位为微克每毫升（g/mL）； V试样定容体积，单位为毫升（mL）。 F试样的稀释倍数； m试样质量，单位为克（g）； 结果保留3位有效数字。 8 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10 %。 DBS22/0012012 4 A A 附 录 A （资料性附录） D-异抗坏血酸的液相色谱图 抗坏血酸和D-异抗坏血酸标准溶液色谱图见图A.1 图A.1 抗坏血酸和D-异抗坏血酸标准溶液色谱图 1，D-异抗坏血酸（浓度为 20 g/mL）；2，抗坏血酸（浓度为 20 g/mL） 含抗坏血酸和D-异抗坏血酸的食品样品液相色谱图见图A.2 图A.2 含抗坏血酸和D-异抗坏血酸的食品样品液相色谱图 1，D-异抗坏血酸；2，抗坏血酸 _
