1、高二生物 编号：SWXX115教师批阅定等血红蛋白的提取和分离导学案（一）编写：王楚松 审核：高二生物组 包科领导：李新华 班级： 组别： 姓名： 【学习目标】1、能记住色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理； 2、能知道缓冲溶液的作用及配制；【学习重难点】重点：凝胶色谱法的原理和方法 难点：凝胶色谱法的原理【学习过程】引入：蛋白质是生命活动不可缺少的物质。对蛋白质的研究与应用，首先需要获得纯度较高的蛋白质。因此，从复杂的细胞混合物中提取、分离高纯度的蛋白质是生物科学研究中经常要做的工作。知识点一：知识回顾（查阅资料，小组讨论）1、蛋白质的基本组成单位是 。其基本组成元素是 。2、氨基酸的结
2、构通式为： 。3、蛋白质结构多样性的原因： 、 、 、 。 知识点二：基础知识凝胶色谱法（阅读教材P6465相关内容）1、蛋白质的物理性质： 、大小、 、 、吸附性质、 等千差万别，由此提取和分离各种蛋白质。2、概念：凝胶色谱法也称作 ，是根据 分离蛋白质的有效方法。3、原理：大多数凝胶是由 构成的小球体，内部有许多贯穿的通道，当不同的蛋白质通过凝胶时， 的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程 ，移动速度 ；而 的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在 移动，路程 。相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。4、凝胶材料：多孔性，多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。5、分离过程： 混合物上柱洗脱大分子流动
3、快、小分子流动慢收集大分子收集小分子 洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。6、作用： 分离蛋白质，测定生物大分子分子量，蛋白质的脱盐等。想一想2： 凝胶色谱柱的直径大小会影响分离的效果吗? 2、凝胶色谱法分离度与凝胶色谱柱的高度有关吗?练一练2： 用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质（ ）A、路程较长，移动速度较慢 B、路程较长，移动速度较快C、路程较短，移动速度较慢 D、路程较短，移动速度较快知识点三：基础知识缓冲溶液（阅读教材P65相关内容）1、作用：在一定范围内，缓冲溶液能抵制 对溶液 的影响，维持pH基本不变。2、由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成（如H2CO3
4、 ，NaH2PO4 等），调节酸和盐的用量，可配制不同pH的缓冲液。3、配制：通常由 种缓冲剂溶解于水中配制而成，调节缓冲剂的 就可以制得 缓冲液。4、生物体内进行的各种生物化学反应都是在一定的PH下进行的，因此，缓冲溶液的 和 ，在生物化学的研究工作中有着极其重要的意义。想一想3： 某人喝入大量的食醋后是否会引起内环境中的pH明显下降？为什么？练一练3： 人体剧烈运动，当肌肉细胞缺氧时，pH是降低还是升高？pH的这种变化是由哪种物质引起的？需何种缓冲物质进行调节（ ）A、降低、CO2、NaHCO3 B、升高、CO2、H2CO3C、降低、乳酸、NaHCO3 D、升高、乳酸、NaHCO3 知识点
5、四：基础知识电泳（阅读教材P55相关内容）1、概念：带电粒子在 的作用下发生 的过程。2、原理：许多重要的生物大分子，如 、 等都具有 的基团，在一定pH下，这些基团会带上 或 。在电场的作用下，这些带电分子会向着 移动。电泳利用了分离样品中各种分子 以及分子本身的 、 不同，使带电分子产生不同的 ，从而实现样品中各种分子的分离。3、常用的分离方法： 、 。4、分离过程：在一定pH下，使蛋白质基团带上正电或负电；加入带负电荷多的SDS，形成“蛋白质SDS复合物”，使蛋白质迁移速率仅取决于 。想一想4： 1、多数蛋白质的等电点近于5，一般含碱性基团较多的蛋白质的等电点 （“偏高”还是“偏低”）。
6、2、根据等电点的不同，你能用 方法将不同种类的蛋白质分子分开。 3、简述根据等电点分离不同种类的蛋白质分子的原理。练一练4： 电泳是指带电粒子在电场的作用下向着与其所带电荷 的电极移动。（）A、相同 B、相反 C、相对 D、相向【课堂小结】【当堂检测】1、凝胶色谱法分离蛋白质的依据是（ ）A、对其他分子的亲和力 B、溶解度C、所带电荷多少 D、相对分子质量的大小2、凝胶色谱法中所用的凝胶的化学本质大多是（ ）A糖类化合物 B脂质 C蛋白质 D核酸3、缓冲液的作用是：在一定范围内，抵制外界的影响来维持 基本不变。（）A、温度 B、pH C、渗透压 D、氧气浓度4、凝胶色谱分离法分离蛋白质时，凝胶
7、的种类较多，但其作用的共同点是（ ）A、改变蛋白质分子通过凝胶时的路径B、吸附一部分蛋白质，从而影响蛋白质分子的移动速度C、将酶或纽胞固定在凝胶中D、与蛋白质分子进行化学反应，从而影响其移动速度5、下列各项中，一般不影响凝胶色谱法分离蛋白质中的分离度的是（ ）A、层析柱高 B、层析柱的直径C、缓冲溶液 D、样品的分布 6、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中决定蛋白质或多肽移动速度的主要因素是 ( )A、蛋白质分子所带的电荷 B、蛋白质分子的形状C、蛋白质分子的相对分子质量 D、缓冲溶液的pH7、下面说法不正确的是（ ）A、在一定范围内，缓冲溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液pH的影响，维持pH基本不变B、缓冲溶液通常由12种缓冲剂溶解于水中配制而成C、电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程D、透析袋能使大分子自由进出，而将小分子保留在袋内【课后反思】本节课我最大的收获是 我还存在的疑惑是 我对导学案的建议是
