1、子色谱时，选择抑制型色 谱柱（5.3.1）按照离子色谱参考条件（7.1.1）进行分析测定；当采用非抑制型离子色谱时， 选择非抑制型色谱柱（5.3.2）按照离子色谱参考条件（7.1.2）进行分析测定。以标准系列溶 液中目标化合物的浓度（mg/L）为横坐标，以峰高或峰面积为纵坐标，建立氨、甲胺、二 甲胺和三甲胺校准曲线。在本标准规定的离子色谱条件下，目标化合物的标准色谱图见图 1 和图 2。 表 1 目标化合物标准系列浓度 序号 标准系列浓度 (mg/L) 氨 甲胺 二甲胺 三甲胺 1 0.025 0.10 0.10 0.10 2 0.05 0.20 0.20 0.20 3 0.25 1.00 1
2、.00 1.00 4 1.00 4.00 4.00 4.00 5 5.00 20.0 20.0 20.0 5 1-氨；2-甲胺；3-二甲胺；4-三甲胺。 图 1 标准色谱图（抑制型） 1-氨；2-甲胺；3-二甲胺；4-三甲胺。 图 2 标准色谱图（非抑制型） 7.3 试样测定 按照与标准曲线的建立（7.2）相同的步骤及离子色谱条件进行试样（6.2）的测定。 7.4 空白试验 按照与试样测定（7.3）相同的步骤及离子色谱条件进行实验室空白试样（6.3）的测定。 8 结果计算与表示 8.1 结果计算 空气中氨、甲胺、二甲胺、三甲胺的体积质量浓度按照公式（1）进行计算： nV 0 .10 1 = （
3、1） 式中：样品中目标物的浓度，mg/m3； 1试样中目标物浓度，mg/L； 10.0吸收液体积，ml； 6 Vn标准状态（273.15 K，1013.25 hPa）或参比状态（298.15 K，1013.25 hPa）下 的采样体积，L。 8.2 结果表示 测定结果小数点后位数与检出限保持一致，最多保留三位有效数字。 9 精密度和准确度 9.1 精密度 八家实验室分别对含有目标化合物中、低两种浓度的统一实际样品（氨、甲胺、二甲胺 和三甲胺的中浓度实际样品浓度分别为 1.11 mg/m3、1.72 mg/m3、1.75 mg/m3、2.39 mg/m3； 低浓度实际样品浓度分别为 0.278
4、mg/m3、0.104 mg/m3、0.105 mg/m3、0.169 mg/m3） ，进行 了 6 次重复测定，实验室内相对标准偏差分别为 0.3%4.8%和 0.5%6.4%，实验室间相对 标准偏差分别为1.6%5.2%和3.7%5.4%， 重复性限分别为0.11 mg/m30.18 mg/m3和0.02 mg/m30.03 mg/m3，再现性限分别为 0.14 mg/m30.27mg/m3和 0.02 mg/m30.05 mg/m3。 9.2 准确度 八家实验室分别对含有目标化合物中、低两种浓度的统一实际样品（氨、甲胺、二甲胺 和三甲胺的中浓度实际样品浓度分别为 0.507 mg/m3、
5、0 mg/m3、0 mg/m3、0.777 mg/m3；低 浓度实际样品浓度分别为 0.096 mg/m3、0 mg/m3、0 mg/m3、0.076 mg/m3） ，进行了加标分析 测定，加标量氨、甲胺、二甲胺和三甲胺分别为 0.667 mg/m3、1.67 mg/m3、1.67 mg/m3、1.67 mg/m3和 0.2 mg/m3、 0.1 mg/m3、 0.1 mg/m3、 0.1 mg/m3。 目标化合物加标回收率分别为 86.7% 110%和 85.8%114%，加标回收率最终值分别为 91.2%8.6%105%6.0%和 90.9% 13.0%105%9.6%。 10 质量保证和
6、质量控制 10.1 标准曲线的相关系数应0.995。 10.2 每批样品至少做一个实验室空白和全程序空白，其测定结果应低于方法检出限。 10.3 每 20 个样品或每批次（少于 20 个样品/批）须用校准曲线的中间浓度点进行 1 次标 准校核，标准校核的相对误差应10%，否则应查找原因，重新绘制校准曲线。 10.4 每批样品应做一个空白加标样品，加标回收率应在 75%-120%之间。 11 注意事项 11.1 实验器具及实验环境应防止氨的污染。 11.2 实际样品的酸度会对色谱柱的使用寿命有影响，应选择容量大耐酸性良好的色谱柱。 当样品浓度较高时，可适当稀释，以保护色谱柱的寿命。 7 12 废
7、物处理 实验中产生的废物应分类收集和集中保管，按要求安全处理或委托有资质的单位处置。 8 附录 A （资料性附录） 方法的精密度和准确度汇总表 表 A.1 方法的精密度汇总表 名称 CAS 号 实际样品浓 度（mg/m3） 实验室内相对标 准偏差（%） 实验室间相对标 准偏差（%） 重复性限 （mg/m3） 再现性限 （mg/m3） 氨 7664-41-7 1.11 0.34.8 5.2 0.11 0.19 0.278 0.54.8 5.4 0.03 0.05 甲胺 74-89-5 1.72 0.33.4 1.6 0.13 0.14 0.104 1.55.5 4.9 0.02 0.02 二甲胺
8、 124-40-3 1.75 0.54.2 2.9 0.15 0.20 0.105 1.86.4 4.6 0.02 0.02 三甲胺 75-50-3 2.39 0.63.3 3.1 0.18 0.27 0.169 1.85.2 3.7 0.02 0.03 表 A.2 方法的准确度汇总表 名称 CAS 号 加标浓度 （mg/m3） 实际样品浓度 （mg/m3） 实际样品加标后 浓度（mg/m3） 加标回收率 （%） 加标回收率最终值 P+2 P S（%） 氨 7664-41-7 0.667 0.507 1.11 86.7100 91.28.6 0.200 0.096 0.278 85.8103
9、90.913.0 甲胺 74-89-5 1.67 N.D. 1.72 100106 1033.4 0.100 N.D. 0.104 94.7112 10410.0 二甲胺 124-40-3 1.67 N.D. 1.75 100110 1056.0 0.100 N.D. 0.105 97.0114 1059.6 三甲胺 75-50-3 1.67 0.777 2.39 92.7103 96.87.2 0.100 0.076 0.169 88.6101 93.210.4 Ct 值仍介于 35 和 40 之间，且曲线有明显的对数增长期，判为阳性，报告“检出巴贾 病毒特异性基因（实时荧光 RT-PCR
10、法） ” ，此类样本建议用其他方法进一步验证；否则判为阴性， 报告“未检出巴贾病毒特异性基因（实时荧光 RT-PCR 法） ” 。 检测样本无荧光扩增现象，判为阴性，报告“未检出巴贾病毒特异性基因（实时荧光 RT-PCR 法） ” 。 蜱传巴贾病毒.indd 52019/9/12 14:01:05 6 SN/T 50972019 附 录 A （资料性附录） RNA 病毒核酸提取 A.1 取蜱样本研磨液或细胞培养液上清 140 L 加入 560 L 裂解液（AVL） ，在旋涡混匀器上振 荡 15 s 混匀，室温静止 10 min。 A.2 加入 560 L 无水乙醇终止反应，在旋涡混匀器上振荡
11、15 s 混匀。 A.3 裂解后的液体分两次移入管柱，每次 8 000 r / min 离心 1 min，此时病毒 RNA 会吸附在管柱 底部的膜上。 A.4 加入 500 L 洗液（AW1）至管柱上，每次 8 000 r / min 离心 1 min，弃去 AW1。 A.5 加入 500 L 洗液（AW2）至管柱上，每次 14 000 r / min 离心 3 min，弃去 AW2，进一步离 心 14 000 r / min 1 min，以彻底去除残留在膜上的乙醇。 A.6 加入 60 L 洗脱液（AVE） ，室温静置 1 min。 A.7 将管柱置于 1.5 mL 离心管上，4 离心 8 000 r / min 1 min，得到的 RNA 即可进行实时荧光 RT-PCR 检测。 蜱传巴贾病毒.indd 62019/9/12 14:01:05 屝答鉼博喏尀罒婙塑婦驗葛鹎葛屶葥屝晜恛奎鱢汧楥啓葜鬀腹汒啓鹜葥認貍氀漀渀攀娀圀伀伀瀀伀一樀戀瀀甀眀戀椀甀愀圀娀最洀渀夀匀娀一爀夀焀愀堀挀甀搀瘀稀眀椀愀稀挀儀吀嘀刀眀娀辉退舀祒茤佦蠀懈!牁鄃凍艉芓蕞庂膅!牁鄃凍蝉芓蕞庂膅!牁鄃勍艑芓皫腶!牁
