1、 B. 1. 1. 1 绵羊肺炎支原体引物核苦酸序列 Y!lB-F: 5一CGGAGCCATAAAGTTGTAAT-3 Y!lB-R: 5-CGAAACTCCCGTGGATGCTA-3 B. 1. 1. 2 引物扩增的靶基因和长度 靶基因:膜蛋白 扩增长度511bp B. 1.2 丝状支原体山羊亚种特异性引物 B. 1.2. 1 丝状支原体山羊亚种引物核昔酸序列 MMMLC2-L: CAATCCAGATCATAAAAAACCT MMMLC2-R: CTCCTCATATTCCCCTAGAA B.1.2.2 引物扩增的目的基因 革E基因LPPA 扩增长度1049bp B.2 PCR检测结果凝胶电泳
2、图示 PCR检测结果凝胶电泳因如图B.1和图B.2所示。 6 750 bp 500 bp M 1 23456 DB45/T 2198-2020 注:M、标准DNA分可二量(DM2000)1.绵羊肺炎支原体(+)可2.隐秘杆菌F俨3.曼氏杆菌(-)4.巴氏 杆菌(一5二状支原体山羊亚种。1l水(-hh与表示检狈ttJJf为阳性表示检测结果为 阴性。 图B.1 绵羊肺炎支原体PCR检测结果琼脂糖;疑胶电泳图 :1 2 3 :) 6 lOOObp- 1000 b(r二 j主 :M、标准DNA分子量(DM2000); 1.丝状支原体山羊亚种(+); 2.隐秘杆菌(-); 3.曼氏杆菌(-); 4.巳
3、民杆菌(-); 5.绵羊肺炎支原体(-); 6.水(-)0 +表示检测结果为阳性表示检测结果为阴 性。 图B.2 丝状支原体山羊亚种PCR检测结果琼脂糖;疑胶电泳图 7 D845/T 2198-2020 附录C (规范性) 微量间接血凝试验 c. 1 方法;是要 微量间接血凝试验口l用于羊支原体肺炎的诊断和监测。其原理是利用结合在红细胞七的羊支原体肺 炎抗原在与血清中的抗体反应后，出现肉眼可见的JEA集现象，据此便可判断被检者血清是否含有羊支原 体肺炎抗体。 。2式开IJ 如下: 羊支原体肺炎问接血削试验抗原; 一-1a2HP0 1; KH2 P0 4; 一-1aO(分忻纯)。 c. 3 设备
4、和仪器 如下: 恒温培养箱: 一一离心机: 微型振荡器; 一一天平: 移液器; 一-96孔V型(90度孔底)微量血凝反应板: 100 m1磨口锥形瓶: 一-1000 m1容量瓶。 C.4 操作步骤 c. 4.1 材料准备 C. 4. 1. 1 稀释液 C. 4. 1. 1. 1 取NaCl.25 g、Na2HPO 19.34 g, KH2 PO; 2.86 g放入1000mL容量瓶中，加蒸馆水完全溶 解后定容，过滤分装，15磅15min高压灭菌，即成0.15 moL/l磷酸盐缓冲液(PBS)。 C. 4. 1. 1.2 取上述溶液98rr止和健康兔血清2mL放入100mL磨口锥形瓶中，混合，无
5、菌分装，4 0C保存备 用。 8 DB45/T 2198-2020 C.4. 1.2 被检血清 无菌采集待检羊血液J二分离血洁，检骄前56C灭能30mino C.4.2 试验 C. 4. 2.1 加稀释液 取一洁净96 子LV型血凝板，每个样品为一组，15孔加入稀秤液30L。 C.4. 2. 2 稀释血清，、剧时队，飞) 刊 丁伞第1孔加入待检血清30L，周移F阳市1至孔稀释至第5孔，弃3011 /b-, ilt时15孔待检血洁的稀释度 /吨电 依次为1:2 (1), 1: 4 (纱，1:8(3), :16(功，1: 32 (5)。同法稀释阳性及阴性血洁，阴性血洁如稀释至 第四孔，甜留第五孔作
6、为稀释液对照斗， C.4.2.3 加间接血凝抗原 说1 飞毛 被检血;青备孔、阴性血洁各孔、阳性血?jF布各孔、稀释液对照往孔均力口间接血凝抗原30111。力日完后， 振荡混匀，37C静置2h，判定结果。 C.5 结果判定 C. 5.1 判定标准 。 如下: a) 红细胞呈细沙粒样均匀铺于孔底者为忡忡，即10Q%凝集: / b) 红细胞均匀铺于孔底，但边缘不墨齐且稍向孔底集中者为十十十，即7f:iYo凝集; . I c) 红细胞于孔底形成一个环状，四周有小凝集块者为十十，即50%凝集: d) 红细胞于孔底形成圆团状，但毡箩不够光滑，且四周稍有1疑集块者为十l，即25%凝集: e) 红细胞于孔底
7、形成圆团.犬，且边缘光滑整齐者为一，e无凝集。1句J C.5.2 判定方法1,1l V,-/II 1I n.d7/ JJ JI吁 JI ,:1f I 在阳性对照、阴性对照血乱稀释刷刷(-)的前提下，对被检血(捕了判定。被检血清1:8稀释 度，凝集值三+以上判定为阳性，1:4稀释是在足集价三+判为可凝，1:4 U下者为阴性。 9 D845/T 2198-2020 10 参考文献 1J TY 5027 无公害食品畜禽饮用水水质 2J TY 5032 无公害食品畜禽饲料和饲料添加剂使用准则 叮叮5149无公害食品肉羊饲养兽医防疫准则 4J 中华人民共和国农业部自用处方药和非处方药管理办法:农业部令2
8、013J第2号 5J 中华人民共和国农业部兽药停药期划定:农业部公告第278弓 中华人民共和国广西地方标准 山羊支原体肺炎防控技术规程 DB 45fT 2198-2020 广西壮族自治区市场监督管理局统一印刷 版权专有侵权必究 ICS 65. 020. 20 B 05 DB62 甘肃省地 、万 标准 DB 62fT 4151-2020 加工型番茄膜下滴灌水肥一体化栽培技术 规程 2020 -05 -15发布2020 - 06 -01实施 甘肃省市场监督管理局发布 目IJI=l 本标准依据GB/T1.1-2009给出的规则蝙写。 本标准自甘肃省农业科学院提出。 本标准自甘肃省农业农村厅归口井监督
9、实施。 DB62/T 4151-2020 本标准起草单位:甘肃省农业科学院土壤肥料与节水农业研究所甘肃省耕地质量建设保 护总站，武威市农业技术推广中心c 本标准主要起草人:车宗贤、张立勤、李国山、崔云玲、崔增团、万估。 I DB62/T 4151-2020 加工型番茄膜下滴灌水肥一体化栽培技术规程 1 范国 本标准规定了加工型番茄膜下滴灌水肥-i本北栽培技术的术语定义、产地条件、产量指标、水肥管 理、病虫害防措、来收及晴膜清除等内容。 本标准适用于河西灌区、沿黄灌区及同类型地区膜下情灌直播移耕加工型番茄的生产c 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅
10、注日期的版本适用于本文件c 凡是不住日朗的号|用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本丈件。 GB 5084 农田灌慨水质标准 GB 16715.3 瓜菜作物种子第3部分:茄果类 GB/T 23416.2-2009 蔬烹病虫害安全防治技术规范第2部分:茄果类 GB/T 50485-2009 世灌工程技术规范 NY/T 393-2013 结色食品农药使用准则 NY/T 496-2010 肥料合理使用准则Jm则 NY 1107-2010 大量元素水市肥料 NY/T 1517-2007加工用番茄 NY/T 5010-2016无公害农产品种植业产地环境条件 DB62/T 2397-2013 露地
11、加工型番茄病虫害防拮技术规章里 DB62/T 2443-2019 粟乙烯吹塑农用地面雹盖薄膜 3 术语和定义 下列术语和走义适用于本文件c 3. 1 水一体化 将;重坦克与施肥融为一体的农业新技术。它借助压力滴灌系统，将可悟性晴体肥料或、液体肥料配兑成 液态肥，与灌溉水一起按比例定时、定量、均匀、准确直接输送到作物根系附近土壤。 3.2 瑭秧 防止采捕时踩踏枝叶，减少病害，将倒向垄均r*J(采摘走道的番茄技蔓、果实按照自然状态摆 放到垄面上c 4 产地环境条件 4.1 产地环境 1 0862/T 4151-2020 符合NY/T5010-2016的要求。 4. 2 土壤肥力 选择具备1li既条
12、件，地面平整，土壤理化性质良好，耕层Ocm20cm有机质含量10g/kg以上，全氢 (N)含量。8g/kg以上，速效睛(PZ05)吉量15mg/kg以上，速效甲含量(KzO)100mg/kg以上，pH值7.0 8.5，土壤含盐量全g/kgo 4. 3 气象条件 4.3. 1 无霜期 种植区域无霜期三130do 4. 3. 2 光照 日照ai数1100h以上。 4. 3. 3 温度 主10C的有效积由2500C以上。 5 产量指标 5. 1 产量 加土塑番面产量120山m2150山m20 5. 2 产量构成 保苗密度4.50万株!hm2-5.25万株!hm2，单株结果数5060个，单果重60g8
13、0go 6滴灌系统组成及去装 6. 1 系统组成 滴灌系统主要由首部系统、配水营阿、滴灌带组成。 6. 2 灌j既水要求 灌i既才O.K.质符合GB5084和GB/T50485-2009的要求，且要求水体:由度三100NTU，坦;少含量三50mgILo 6. 3 系统去装 系统各部分器件选择和安装均按照GB/T50485-2009的要求进行。 7 栽培技术 7. 1 选地与整地 前若以小麦、玉米、棉花、豆类、油料、绿肥为直，避免与辣椒、马铃薯等相科作物连作。措前结 合施基肥情璃一次，深度15cm18cm，耕后及时把糖，镇压c 2 DB62/T 4151-2020 7.2 种子 7.2.1 种子质量 种子质量符合G
