1、 ，评价技术与方法 基金项目 年国家药品抽检计划项目 国药监药管 号，序号 ；广西药品监督管理局科研计划项目 编号：桂药监科 号（直属）作者简介 何虹，女，主管药师，研究方向：药品检验与分析。：通讯作者 朱健萍，女，主任药师，研究方向：药物分析。：多西他赛注射液质量分析何虹，孙煜，曾庆花，李智明，黄慧，朱健萍（广西壮族自治区食品药品检验所，广西 南宁 ）摘要 目的：评价多西他赛注射液的质量现状及存在问题。方法：按照法定标准对样品进行检验，并进行探索性研究，对数据结果进行统计分析。结果：按现行方法检验 批次样品，结果均合格，合格率为 。经探索研究发现部分批次样品使用的未覆膜胶塞，检出抗氧剂并超过
2、人每日允许暴露量（，）；国内制剂的粒径分布与原研制剂不一致；国内制剂的释药速率与原研制剂存在一定差异；部分企业的样品中检出枸橼酸，与企业的处方及说明书不符。结论：目前国内多西他赛注射液的总体质量较好，部分企业生产工艺需要改进。关键词 多西他赛注射液；质量分析；抽检 中图分类号 文献标志码 文章编号 （），（，）：，：，：；多西他赛是紫杉烷半合成产物，为紫杉醇类药物，通过促进微管双聚体装配成微管，同时通过防止去多聚化过程而使微管稳定，阻滞细胞于 和 期，从而抑制癌细胞的有丝分裂和增殖。近年来多用于治疗恶性肿瘤，在临床上治疗乳腺癌、卵巢癌和非小细胞肺癌等恶性肿瘤中已取得较好的疗效 。多西他赛最早于
3、 年由法国罗勒公司（）研制生产 ，原料收载于美国药典（）、欧洲药典 （）、英国药典 （），目前仅有注射液一种剂型。其注射液最早由法国赛诺菲（）公司研发，国内江苏恒瑞医药股份有限公司于 年首次仿制成功。本次通过对 批次多西他赛注射液抽检，将其质量进行分析，为该药品质量的提高和监管提供技术依据。仪器、试药及材料 仪器 高效液相色谱仪（美国赛默飞公司）、高效液相色谱仪（公司）、高效液相质谱仪（美国安捷伦科技有限公司）、动态激光粒度分析仪（公司）、加热磁力搅拌器、电子天平。试药多西他赛对照品（批号 ，按 计，含量为 ），多西他赛 系统适用性 年第 卷第 期对照品（批号 ），枸橼酸对照品（批号 ，含量：
4、，干燥 后使用，抗氧剂对照品：，二叔丁基苯酚（批号 ，含量 ）、，二叔丁基对甲酚（，批号 ，含量 ）、抗氧剂 （批号 ，含量 ）、抗氧剂 （批号 ，含量 ）、与抗氧剂 （批号 ，含量 ）均购自中国食品药品检定研究院；，二叔丁基 羟基苯甲醛（批号 ，含 量 ），抗 氧 剂 （批 号 ，含量 ）、抗氧剂 （批号 ，含量 ）与抗氧剂 （批号 ，含量 ）均购自 公司，二叔丁基 羟甲基苯酚（批号 ，含量 ）与抗氧剂 （批号 ，含量 ）均购自上海安谱实验科技公司。实验中使用的其他有机溶剂为色谱纯，液相使用水为超纯化水，其余化学试剂均为分析纯。材料 透析袋（，批号 ，截留分子质量 ）方法与结果 样品收集经查
5、询国家药监部门数据系统，目前国内多西他赛原料药有 家生产企业；多西他赛注射液共 家制剂生产企业，个批准文号，共有 个规格；进口药品国内分装生产企业 家，个批准文号，个规格。由于多西他赛为抗肿瘤类药物，注射剂单价较昂贵，抽验计划限定抽取 批次样品，未抽取多西他赛原料药。本次抽检涉及 个生产企业（以 表示，抽样量分别为 、批），占总生产企业数的 ；涉及 个批准文号，占总批准文号数的 。其中企业 样品为原研企业国内分装，企业 样品通过仿制药一致性评价。法定检验多西他赛注射液包装规格有 种，一种为多西他赛注射液另附专用溶剂（注射用乙醇溶液）型（以下简称“瓶装”），包含的制剂规格有 、；一种为不含专用溶
6、剂型（以下简称“瓶装”），包含的制剂规格有 、。多西他赛注射液在 和日本药典 （）中有收载，在 中国药典 年版、中均未有收载。本次抽样 批次多西他赛注射液，按现行标准检验，结果 批次均符合规定，合格率 。含量测定结果，经比较企业 样品含量离散度较大，企业 样品的含量较其他生产企业样品的含量偏低，见图 。提示企业 应注意样品生产的批间差异。图 各生产企业样品含量结果对比从法定检验结果中发现，多西他赛注射液现行质量标准仍存在一些问题：不同企业标准均不相同，本次检验共涉及 个标准，标准在控制项目的设置上差异不大，但相同项目的检查方法上差异较大，限度控制不统一，不利于质量控制。各标准的有关物质项和含量
7、测定项色谱条件不相同，对特定杂质的命名不统一，控制的杂质种类也不同，无法有效比较国内制剂与原研制剂的质量差异。探索性研究根据多西他赛注射液的特点，以及标准检验中发现的问题，重点从包材相容性、药品的粒度及粒径分布、枸橼酸与 值等相关性方面开展探索性研究，评价技术与方法考察多西他赛注射液的整体质量状况，考察国内企业生产的药品与原研药品的差异，评价现行标准检验方法的科学性、合理性 。氯化丁基胶塞中抗氧剂迁移情况研究多西他赛注射液内包装使用的胶塞为药用卤化丁基橡胶塞或注射液用覆聚四氟乙烯 六氟丙烯的共聚物膜氯化丁基橡胶塞。根据 化学药品与弹性体密封件相容性研究技术指导原则 ，密封件应与药品具有良好的相
8、容性，即不可引入存在安全性风险的浸出物。为了防止橡胶老化，生胶中或胶塞的生产过程中常添加抗氧剂，而注射剂作为高风险制剂，有必要控制抗氧剂迁移入药物。通过参考相关文献 ，建立了 法测定多西他赛注射液中 种抗氧剂的含量：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇（）甲酸铵溶液（甲酸调 至 ）（）为流动相，采用梯度洗脱（，；，；，；，；，；，）；柱温 ；流速为 ；检测波长 ；进样体积 。取样品 瓶，精密加入一定量的甲醇，配制成每 中约含多西他赛 的溶液。记录色谱图；另取对照品制成每 中约含抗氧剂 、抗氧剂 、抗氧剂 、抗氧剂 与抗氧剂 各 、，二叔丁基苯酚、，二叔丁基 羟基苯甲醛、抗氧剂 、，二叔丁基
9、羟甲基苯酚、抗氧剂 各 的混合溶液。按外标法以峰面积计算，即得。色谱图见图 。所建立的方法经验证，方法成立，为西他赛注射液中氯化丁基胶塞中抗氧剂的测定提供参考方法。，二叔丁基 羟甲基苯酚；，二叔丁基 羟基苯甲醛；，二叔丁基苯酚；抗氧剂 ；抗氧剂 ；抗氧剂 ；抗氧剂 ；抗氧剂 ；抗氧剂 ；抗氧剂 图 种抗氧剂 典型图谱考察本次国评抽验中 家生产企业不同批号的 批样品，并对其中的 批次样品进行平行倒置试验，将其倒置放置于 冰箱 个月。家企业 批次样品中检出抗氧剂迁移，检出的抗氧剂为 、抗氧剂 ，其他抗氧剂未检出。按照多西他赛注射液每日最大使用量（）计算，分别得出 和抗氧剂 的每日摄入量，结果见表
10、。根据相关的文献报道 ，以及美国国家环保局报道的部分抗氧剂的毒性数据，得到抗氧剂 及 在注射途径的 分别为 、。企业 样品正常放置检出抗氧剂 最大摄入量为 ，倒置样品检出的抗氧剂 最大摄入量为 ，企业 样品正常放置检出的 最大摄入量为 ，倒置样品检出的 最大摄入量为 ，检出有抗氧剂的样品，均使用了为覆膜的胶塞，其他企业样品使用了覆膜胶塞的样品，抗氧剂检出量较低或未检出，提示未覆膜胶塞与多西他赛注射液相容性差，表明样品中存在一定安全风险。粒径及粒径分布研究多西他赛注射液为胶束制剂，属于特殊注射剂。通常胶束以混合胶束的粒径、多分散指数（，）、包封率和载药量为评价指标 。因此，特殊注射剂的关键质量属
11、性包含粒径及分布。本次抽检采用 年第 卷第 期 动态激光粒度分析仪测定粒径及粒度分布，取多西他赛注射液，用 氯化钠注射液配成浓度为 的供试品溶液，溶液临用新配。表 多西他赛注射液中抗氧剂迁移量（）生产企业批号规格 摄入量（）抗氧剂 抗氧剂 摄入量（）企业 企业 企业 企业 企业 倒置 倒置 企业 企业 倒置 倒置 企业 倒置 经测定，企业 样品平均粒径为 ，其他生产企业样品溶液的平均粒径大多在 范围，与企业 样品平均粒径相比，生产企业样品差异不明显。粒径分布情况，企业 样品溶液的粒径分布系数（值）为 ，为单分散体系（仪器使用说明书中指出 小于 为单分散体系），说明其胶束的分散粒径大小均匀，即其
12、胶束溶液有更好的稳定性；其他企业样品溶液的 值均在 范围内，属于多分散体，说明胶束溶液均能形成较好的分散体，但其粒径分散大小不一致。液体胶束体系释药情况的研究多西他赛属于难溶性药物，使用聚山梨酯 表面活性剂作为胶束材料，从而改善其溶解性。多西他赛注射液的胶束组分（聚山梨酯 ）是影响活性药物体内分布的重要因素，该胶束体系在体内的释药速率，对药物疗效有一定影响。采用动态膜透析法考察多西他赛注射液胶束体系释药速率，对 个生产企业 批次样品进行胶束体系 、内释药情况的考察。参考相关文献 ，建立 法测定释放介质中药物的含量，以乙腈 水（）为流动相，色谱柱为 （，）；流速为 ；柱 温 ；进 样 量 为 ；
13、检 测 波 长：。以磷酸盐缓冲液（，吐温 ）作为释放介质，精密吸取供试品溶液 装入预处理过的透析袋（）中，置于 释放介质中，恒温搅拌，转速 ，分别在 、内取 溶液进行测定。对 批次样品 内多西他赛累计释放含量与释放时间绘制释放曲线，见图 。累计释放结果显示，批次样品在 后开始逐步从胶束中释放，到 通过截留分子质量 的 透 析 袋 的 多 西 他 赛 累 计 释 放 量 在 之间，说明聚山梨酯 胶束体系确能延迟多西他赛的释放。以企业 样品的释放量作为参比，到 、，企业 、企业 （）、企 ，评价技术与方法业 （）与企业 的累计释放量均与原研相当，释放速率适中；企业 和经过一致性评价企业 的样品累计
14、释放量均低于企业 ，释放速率较慢；企业 （）样品的累计释放量均高于企业 ，释放速率较快。由此可见，各企业生产的样品体外释放结果与企业 样品存在一定差异，不同厂家样品的释放速率不同。02460102030405060708030G)(%)t(h)810 KDaA(0.5 mL:20 mg)B(0.5 mL:20 mg)B(1 mL:20 mg)C(0.5 mL:20 mg)D(0.5 mL:20 mg)E(0.5 mL:20 mg)E(1 mL:20 mg)F(0.5 mL:20 mg)G(mL:20 mg)H(0.5 mL:20 mg)图 个生产企业的 批样品的体外释放曲线根据研究显示 ，当不
15、存在聚山梨酯 时，多西他赛在体外广泛结合人血浆；存在高浓度聚山梨酯 时，观察到未结合的多西他赛分数升高。当聚山梨酯 浓度达到临界胶束浓度以上，可与活性药物多西他赛共同形成胶束，从而达到增溶目的 ，既影响游离多西他赛的浓度，也延迟多西他赛在体内的血浆清除率，提高药效，导致疗效与毒性发生变化 。从调研资料所得，企业 使用了其特制的聚山梨酯 ，可能与其他企业不同，企业 使用的多西他赛原料为多西他赛三水化合物，其他企业使用的是多西他赛无水化合物，推测可能是原辅料及生产工艺带来的差异造成各企业所形成的胶束体系不一致，从而影响各企业多西他赛的释药情况，影响体内作用效果及不良反应发生。枸橼酸含量及 值的相关
16、研究多西他赛注射液处方工艺中添加了 调节剂枸橼酸，其中只有部分企业明确了处方中枸橼酸的使用量，部分企业未明确用量。参照 中国药典 年版（四部）枸橼酸离子测定方法 ，测定样品中枸橼酸的含量，并结合标准中 值检查项的结果，分析各企业样品枸橼酸加入量与样品 值之间的关系。对本次抽验获得的 批样品（不含同批次）样品进行枸橼酸含量测定，结果见表。企业 、企业 产品测得枸橼酸与处方量基本相符。企业 的说明书、处方、生产工艺中均未提及使用枸橼酸为辅料，但样品中检出枸橼酸，可能存在违规行为或生产线交叉污染的风险。其他企业的说明书中已列出枸橼酸为辅料，但调研问卷中未提供具体的处方量，无法判断其枸橼酸含量与生产工
17、艺是否一致。表 样品中枸橼酸含量测定结果生产企业批量规格枸橼酸处方量（瓶）测得平均值（瓶）处方、说明书中未列 无处方量 无处方量 无处方量 无处方量 无处方量 无处方量 无处方量 由于各企业的 值检查项的检验方法不一致，参照企业 的 值测定方法，对 批次的样品进行测定。将枸橼酸测得量与样品中按企业 测得的 值结果进行比较，结果见图 。从图中所示，大部分 值在 左右的样品中，枸橼酸的测得量按每 多西他赛计均低于 ；企业 的样品以及企业 的样品 值在 左右，其枸橼酸的测得量也相对较高，按每 多西他赛计约为 ，说明这两家企业的样品 值确与枸橼酸的加入量相关，枸橼酸加入量越大，样品 值越低。但企业 样
18、品的 值均在 范围内，其枸橼酸测得量按每 多西他赛计在 范围，其样品的 值并未因枸橼酸的量而降低，提示企业 的样品 值可能还与其他因素相关。讨论 仿制药疗效一致性有待评价多西他赛注射液现行标准有关物质项限度，对比原研产品的控制要求，部分现行标准未控制已知杂质。通过对多西他赛注射液粒径和粒径分布的研究，国内企业生产的样品粒径分布系数与原研产品有一定差异，原研企业品其胶束的分散粒径大小更均匀，具有更好的稳定性，国内生产企业样品溶液粒径分散大小不一致，可能导致胶束状态的不稳定。国内企业和原研企业的液体胶束体系释药情况的不同，可能影响多西他赛注射液的疗效和不良反应情况。年第 卷第 期00.51.01.
19、52.02.500.51.01.52.02.53.03.54.04.5pH G#G(mg/20 mg?C)pH G#G(mg/20 mg?C)A(0.5 mL:20 mg)B(0.5 mL:20 mg)B(1.0 mL:40 mg)B(1.0 mL:20 mg)C(0.5 mL:20 mg)D(0.5 mL:20 mg)E(0.5 mL:20 mg)E(1.0 mL:20 mg)H(0.5 mL:20 mg)F(0.5 mL:20 mg)G(1.0 mL:20 mg)图 各企业样品 值与枸橼酸量的关系图 包材相容性问题部分批次样品中检出抗氧剂 或 ，其最大检出量接近或超过每日最大摄入量，并且检
20、出批次样品均使用了未覆膜胶塞，而使用了覆膜胶塞的制剂中抗氧剂检出量较低或未检出。提示未覆膜胶塞与多西他赛注射液相容性差。处方与生产工艺存在的问题原研企业生产的样品中检出枸橼酸，企业提供的生产工艺、处方和说明书中均未列出枸橼酸，提示可 能 存 在 违 规 行 为 或 生 产 线 交 叉 污 染 的风险。建议针对包材相容性的问题，建议制剂生产企业采用质量好的覆膜胶塞进行样品密封。多西他赛注射液杂质控制水平与原研产品之间存在差异，建议各企业提高杂质控制水平、统一质量标准，更好地对各企业的产品进行控制监管，各生产企业应积极主动开展仿制药质量一致性评价工作，通过与原研样品的释药行为比较，发现问题，改进处
21、方工艺水平，最终达到与原研产品的疗效一致。参考文献 多西他赛 上海医药，（）：，：黄仲义，原研药多西他赛特点及仿制药与其差距 上海医药，（）：国家药品监督管理局关于发布化学药品与弹性体密封件相容性研究技术指导原则（试行）的通告（年第 号）（）：？蒲小聪，陈蕊，游延军 法测定胶塞中抗氧剂 向米卡芬净钠注射液中的迁移 药物分析杂志，（）：陈蓉，晏菊姣 药用丁基胶塞中抗氧剂 的 法测定 中国药师，（）：张旭，傅萍，袁军，等 法同时测定药用卤化丁基胶塞中 种抗氧剂向注射用伏立康唑中的迁移 药物分析杂志，（）：马玉楠，马磊，蒋煜 药品与包装材料相容性研究相关指导原则解读 试验结果的评估 中国新药杂志，（）：，：，：蒋煜，马玉楠，霍秀敏，等 化学药品注射剂与塑料包装材料相容性研究技术指导原则 解读 提取迁移试验方法设计 中国新药杂志，（）：孙静，董文向，吴蕾，等 多西他赛混合胶束的制备及其性能评价 沈阳药科大学学报，（）：，：，：李岸，刘丹，周捷，等 多西他赛人血白蛋白微球的制备及体外释药性质的评价 中国医院药学杂志，（）：，：，：，：，：，：，：国家药典委员会 中华人民共和国药典 年版（四部）北京：中国医药科技出版社，：（收稿日期：）
