1、631浙江中医杂志2 0 2 3年9 月第58 卷第9 期二仙汤对慢性不可预知温和刺激诱导的抑郁小鼠行为学及神经递质水平的影响张蓝郑军献浙江省立同德医院浙江杭州310 0 12摘要目的：研究二仙汤对慢性不可预知温和刺激诱导的抑郁小鼠行为学及血清激素的影响。方法：将40只雌性昆明小鼠随机分成空白组、模型组、中药组和氟西汀组，每组10 只。除空白组外，其余组别使用7 种随机慢性不可预知温和刺激造成小鼠的抑郁样模型，为期4周。第5周开始，中药组给予二仙汤2.0 g/kg灌胃，氟西汀组给予氟西汀6.0 mg/kg灌胃，空白组和模型组给予等体积生理盐水，为期2 周。通过观察小鼠的精神状态、体质量变化情况
2、、糖水享乐、悬尾和强迫游泳等来判别小鼠的行为学状态；使用ELISA检测小鼠血清5-羟色胺（5-HT)、多巴胺(DA)的激素水平。结果：中药组与氟西汀组的体质量均比模型组高（P0.01）,但依然低于空白组；在享乐行为的蔗糖偏好中，模型组处于一个持续低迷的状态，中药组和氟西汀组的给药介入明显改善这种现象（P0.01)；强迫游泳和悬尾的行为学测试中，相比于模型组，二仙汤可以显著提升小鼠在绝望状态下的扎求生欲望，减少其不动时间（P0.01)；血清激素检测结果中，二仙汤可以直观地增强神经递质5-HT、D A 的水平含量（P0.05），从而提升下丘脑的精神愉悦性。结论：二仙汤可以有效改善抑郁小鼠的精神状态
3、、恢复正常的行为欲望，并增加神经递质的表达。关键词二仙汤慢性不可预知温和刺激抑郁行为学神经递质小鼠抑郁症在现今社会中是一种常见的精神类疾病，患者长时间持续处于悲伤和压力的状态下，并且难以参与正常的日常生活。在现代社会，快节奏的生活方式与慢性压力有关，患者时刻处于紧绷状态，这通常会导致下丘脑-垂体等激素轴的调节异常和糖皮质激素水平升高。此前，有研究表明在长期暴露于糖皮质激素的啮齿动物中观察到抑郁和神经元损伤的发生 1.2 。根据世界卫生组织在2 0 17 年的报告，全球约有3.2 2 亿人不同程度地患有抑郁症，抑郁症已成为导致残疾的主要原因之一,并在全球范围内造成疾病负担3二仙汤是现代著名医者张
4、伯讷为治疗女性围绝经期(更年期)症状所创的中药验方。其主要组方为仙茅、仙灵脾、巴戟天、当归、黄柏和知母 4。其中医理论主要为补肾阴、肾阳并调和平衡，且补肾强筋骨。现代临床运用较广泛，主要用于治疗虚损导致的内科外科疾患 5.6 。O本研究主要探讨二仙汤对于慢性不可预知温和刺激抑郁症模型小鼠的行为学及下丘脑-垂体相关激素的影响。材料与方法1.1实验动物与药物：体质量在18 2 2 g的雌性昆明小鼠40 只，购于安徽医科大学实验动物中心，动物许可证号：SYXK（皖）2 0 17-0 0 6。氟西汀购于阿拉丁工业有限公司。酶联免疫吸附试验（ELISA)试剂盒购于江苏酶免实业有限公司。二仙汤组方饮片均由
5、安徽药知源中药饮片有限公司提供，将总量50 0 g二仙汤饮片（仙茅：仙灵脾：巴戟天：当归：黄柏：知母=12：12：10：10：9:9）加水煎煮2 遍后混合，旋蒸浓缩，冻干成粉末后储存于-2 0 环境。1.2造模及分组给药方式：将小鼠随机分为空白组、模型组、氟西汀组和中药组。在适应性饲养1周后，将空白组正常饲养，其余3组进行为期4周的慢性不可预知温和刺激（禁水禁食2 4h、鼠笼倾斜40、昼夜颠倒、束缚2h、醋酸2 4h、湿笼2 4h、夹尾2 4h），7 种刺激随机选取，同种刺激不连续使用。第5周开始灌胃给药，空白组和模型组给予等体积生理盐水，氟西汀组给予6.0 mg/kg，中药组给予2.0 g/
6、kg二仙汤（生药浓度），均为1次/d，持续2周。最后一次给药在悬尾测试和强迫游泳测试前1h。1.3体质量监测：从造模开始每7 天对小鼠进行称体质量。1.4蔗糖偏好实验：从造模开始每7 天进行一次，准备2个水瓶，一瓶为正常纯水，另一瓶为含有2%蔗糖的糖水，两瓶体积均为10 0 mL，同时放置于鼠笼内，每2 h更换632浙江中医杂志2 0 2 3年9 月第58 卷第9 期一次水瓶位置，12 h后测量2 个水瓶的体积并计算出蔗糖偏好率。蔗糖偏好率=糖水消耗量/（糖水消耗量+纯水消耗量）10 0%。1.5悬尾实验：在最后一次给药后禁水禁食1h，用细绳系于小鼠距尾尖1cm处，悬挂高度距地面5cm。由对实
7、验完全不可知的人员在5min内观察并记录小鼠的不动时间。1.6强迫游泳实验：将小鼠逐一单独放置在装满水的圆形桶中，水温保持（2 4土1）。由对实验完全不可知的人员在5min内观察并记录小鼠的不动时间。1.7血清激素测定：在行为学实验结束后第2 天，以1.0mg/kg腹腔注射10%水合氯醛进行麻醉，取各小鼠的眼球血，放置于4冰箱中保存。使用ELISA试剂盒测定血清中5-羟色胺(5-HT)和多巴胺(DA)水平。1.8乡统计学分析：采用SPSS19.0软件对实验所得数据进行分析，结果使用均数土标准差(xs)的形式描述。P0.05表明数据具有统计学差异。2结果2.1体质量变化：图1（A）为各组小鼠为期
8、7 周的体质量变化情况。模型组的体质量变化幅度随时间推移逐渐减轻。进行造模的小鼠在第2 周时体质量有迅速增长的情况，这很可能是抑郁前期出现的报复性饮食造成的，后期体质量随着慢性不可预知温和刺激而持续下降。二仙汤或氟西汀在第5周时开始给药，体质量减轻较模型组显著逆转（P0.01）,并趋于预期。2.2蔗糖偏好结果：如图1（B），在蔗糖偏好测试中，空白组小鼠更喜欢蔗糖溶液，在整个实验过程中，该组别始终保持了较高的蔗糖偏好指数，这与正常小鼠的享乐偏好相似。接受刺激的造模小鼠在第2 周表现出短暂较高的蔗糖偏好指数，推测这是身体的自我表现保护的行为，小鼠在感知到外界刺激压力的情况下急切地需要享乐。在第3周
9、，由于慢性不可预知温和刺激的压力，小鼠开始表现出抑郁综合征。在第5周时给予二仙汤或氟西汀，小鼠的蔗糖偏好指数显著增加（P0.01）,并趋于预期。40-宝自组模型组A型组B中药地中药鱼100-西集西(）喜306020-010-5时间（周）时间（周）注：与模型组比较，*P0.01。图1名各组小鼠体质量变化及小鼠蔗糖偏好率情况2.3悬尾测试：悬尾是表达小鼠抑郁行为的一种测试，将小鼠处于一个无法受力的状态，正常小鼠会使劲挣扎，以期寻找到出口或者受力物品。在图2（A)中，模型组小鼠在慢性不可预知温和刺激下逐渐出现抑郁情况，即感知到外界无法受力的绝望状态，挣扎时间远小于正常组小鼠，出现不动、不挣扎的行为。
10、在第5周给予二仙汤或者氟西汀后明显改善了抑郁状态（P0.01）。2.4强迫游泳测试：强迫游泳测试与悬尾测试的目的类似，都是观察小鼠在无法受力的绝望状态下的挣扎情况。如图2（B）所示，二仙汤可以逆转小鼠的抑郁状态（P0.01)。A200B180#150150-120工100-500-0联联注：与空白组比较，#P0.01;与模型组比较，*P0.01。图2各组小鼠悬尾测试及强迫游泳测试情况2.5小鼠血清5-HT和DA水平变化：如图3所示，经历慢性不可预知温和刺激后，与空白组相比，模型组小鼠5-HT和DA水平显著下降。然而，二仙汤灌胃可调节其水平（P0.01）。提示二仙汤可通过调节小鼠血清激素水平改善
11、抑郁症状。AB300-807#60-(1/au)LH-s200-(1/au)va40-100-20-00注：与空白组比较，#P0.01；与模型组比较，*P0.05,*P0.01图3各组小鼠5-HT水平及DA水平比较3讨论抑郁症已成为危害人类生活健康的主要疾病之一，尤其在现今社会的高速发展中，快节奏、高压力的持续外界刺激使得精神时刻紧绷，从而导致抑郁症的发作。本研究中，采用慢性不可预知温和刺激对小鼠进行抑郁状态造模，连续2 8 天的高强压力使得小鼠产生了绝望行为，精神萎靡，体质量下降，蔗糖享乐开始丧失。强迫游泳和悬尾的行为学测试明显表明了小鼠的绝望抑郁状态，与前面的体质量和蔗糖偏好变化情况表达出
12、了抑郁模型共同之处。633浙江中医杂志2 0 2 3年9 月第58 卷第9 期绝望是抑郁症的核心症状，强迫游泳和悬尾测试是被广泛用于评估这种情绪状态的经典行为实验 7.8 。动物的强迫游泳和悬尾测试诱导的静止状态代表了一种类似于人类抑郁症的状态；也就是说，在不可避免的压力下，动物会变得缺失运动的欲望。正如预期的那样，氟西汀(6.0mg/kg)降低了本研究强迫游泳和悬尾测试中小鼠的静止时间,这表明该模型具有潜在的预测有效性。二仙汤的灌胃给药较模型组来说，显著减少了强迫游泳和悬尾测试的静止时间（P0.01），说明二仙汤对抑郁情绪有缓解作用。血清激素水平方面，大脑单胺类神经递质紊乱在重度抑郁症中发挥
13、着极其重要的作用。根据前人单胺理论所述 9,脑胺活动的功能性下降,尤其是DA和5-HT含量水平的不稳定，会直接导致神经紊乱抑郁症。中药复方的临床疗效是其多个活性成分交互作用的综合体现，属于整体的辨证论治，而不是单一化学成分的单独作用。仙茅味辛，性热，归肾、肝、脾经 10 ,具有诱导巨噬细胞活化、抗氧化、免疫调节、神经保护等药理学作用 1。巴戟天性微温，其味甘、辛，有补阳暖宫、固精增髓、延缓衰老、抗抑郁等药理学作用 12 。仙灵脾性味辛甘，归肝肾经，能够治疗骨质疏松、围绝经期综合征，有抗氧化等药理学作用 13。当归作为十大陇药之一，味偏甘辛、性微温，归肝、心、脾三经，可上调神经生长因子和脑源性神
14、经营养因子、抑制钙离子内流，能促进海马组织再生、调节单胺类神经递质系统、清除氧自由基、保护神经细胞，在治疗抑郁症方面应用仅次于茯苓、甘草 14。黄柏味苦、性寒,归肾、膀胱经,其主要成分小檗碱可以通过上调海马体中脑源性神经营养因子的表达，改善皮质酮引起的小鼠抑郁样行为 15。知母苦、甘、寒，归肺、胃、肾经，在脂多糖诱导的小鼠模型中具有抗抑郁行为学药理作用 16 本实验结果体现了中药复方的多靶点通路作用，具体为二仙汤成分多方位针对抑郁症在神经保护、神经营养因子、神经递质激素等方面共同发挥作用。虽然实验结果显示，二仙汤或者氟西汀在本研究中的疗效并不能使得小鼠恢复到正常空白对照水平，但总体的改善趋势依
15、然是明显的，值得进一步研究。4参考文献1Peritore A F,Crupi R,Scuto M,et al.The role ofannexin Al and formyl peptide receptor 2/3 signal-ing in chronic corticosterone-induced depression-likebehaviorsandimpairmentinhippocampal-dependent memoryJ.CNS Neurol Disord Drug Targets,2020,19(1):27-43.2Gold P w.The organization of
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