1、第 41 卷 第 5 期2023 年 10 月石河子大学学报(自然科学版)Journal of Shihezi University(Natural Science)Vol.41 No.5Oct.2023收稿日期:2022-05-27 基金项目:山西省自然基金项目(201901D111338);山西中医药大学科技创新能力培育计划项目(2019PY-120);山西中医药大学研究生创新创业项目(2021CX010)作者简介:高丽(1977),女,副教授,从事方剂效用及其物质基础研究,e-mail:342014263 。DOI:10.13880/ki.65-1174/n.2023.22.032文章编
2、号:1007-7383(2023)05-0615-07防己黄芪汤对气虚水负荷模型大鼠的利尿作用及对肾脏 AQP14 表达的影响高丽,严文允,李茹超,魏楠楠,周文静,白赟(山西中医药大学,山西 晋中 030619)摘要:目的 观察防己黄芪汤对气虚水负荷模型大鼠的利尿作用及肾脏水通道蛋白(Aquaporin,AQP)1 4 表达的影响。方法 采用“游泳疲劳+饮食失节”复合因素诱导制备气虚大鼠模型,生理盐水造成水负荷状态,设防己黄芪汤低、中、高剂量组,另设空白对照组,每组 10 只。观察各组大鼠一般状态及体重变化,用显微镜观察各组大鼠的肾脏病理变化,Real-Time PCR 法和 Western
3、Blot 法检测各组大鼠肾脏 AQP14 的 mRNA 和蛋白表达。结果 给药后,与模型组比较,防己黄芪汤中、高剂量组一般状态良好,体重明显增长(P0.05)。肾脏病理检测结果显示,模型组有肾小管扩张化,其余各组未见异常变化。Real-Time PCR 和 Western Blot 结果显示,与空白对照组比较,模型组大鼠肾脏组织 AQP 14 mRNA 和蛋白表达明显升高(P0.05);与模型组比较,防己黄芪汤中、高剂量组大鼠肾组织AQP 14 mRNA 和蛋白表达明显降低(P0.05)。结论 防己黄芪汤对气虚水负荷模型大鼠有明显的利尿作用,这可能与下调肾 AQP 14 的 mRNA 和蛋白表
4、达有关。关键词:防己黄芪汤;气虚;盐水负荷;水通道蛋白;利尿作用中图分类号:R285.5文献标志码:ADiuretic effect and the expression of AQP14 in kidney of Fangji Huangqi decoction on rats with Qi-deficiency and saline-loadingGAO Li,YAN Wenyun,LI Ruchao,WEI Nannan,ZHOU Wenjing,BAI Yun(Shanxi University of Traditional Chinese Medicine,Jinzhong,Sha
5、nxi 030619,China)Abstract:Objective The study was to observe the diuretic effect and the expression of Aquaporin(AQP)1 4 in kidney of Fangji Huangqi Decoction on rats with Qi-deficiency and saline-loading.Methods The model rats of Qi-deficiency were established by com-posite factors of exhaustive sw
6、imming and intemperance of taking food,which were given saline by intragastric administration.The model rats were randomly divided into model group and medication groups(high,middle and low dosage)of Fangji Huangqi Decoc-tion.Another blank group was controlled.The changes of general state and body w
7、eight of rats in each group were observed.The path-ological changes of kidneys were observed by microscope.Real-Time PCR was used to detect mRNA expression of AQP 1 4,and Western Blot was used to detect protein expression of AQP 1 4 in kidneys.Results After administration,compared with the model gro
8、up,the middle and high dose groups of Fangji Huangqi Decoction were generally in good condition and their body weight increased significantly(P0.05).Renal pathological examination showed that tubule expansion could be observed in the model group,while no obvious abnormal changes in the other groups.
9、Compared with blank group,mRNA and protein expression of AQP 14 in model group were increased significantly(P0.05).Compared with the model group,mRNA and protein expression of AQP 1 4 in middle and high dose group of Fangji Huangqi Decoction were decreased significantly(P0.05).Conclusion Fangji Huan
10、gqi decoction could sig-nificantly improve and regulate water metabolism in rats of Qi-deficiency and Saline-loading,and down-regulating mRNA and protein expression of AQP 14 in renal might be one of its action mechanisms.Key words:Fangji Huangqi decoction;Qi deficiency;saline loading;aquaporin;diur
11、etic effect616 石河子大学学报(自然科学版)第 41 卷防己黄芪汤是源自金匮要略的经典名方,由防己、黄芪、白术、炙甘草、生姜、大枣组成,功效益气健脾,利水消肿。根据方证相关理论,防己黄芪汤正对气虚水肿之证。临床上,防己黄芪汤加减用来治疗多种水液代谢相关疾病,如肾病综合征1、心力衰竭2、高血压3等,凡辨证属气虚的,均疗效显著。现代研究发现水通道蛋白(aquaporin,AQP)是位于细胞膜上的一种特殊蛋白,负责运输水及一些小分子通过细胞内外,具有高度选择性,以维持组织器官甚至全身水平衡。目前为止,已发现 13 种同工型 AQP,在 肾 脏 中 发 现 9 种(AQP1 AQP8 和
12、AQP11),其中,AQP1 4 在尿液形成中起着重要作用。故本实验选择气虚水负荷模型大鼠来研究防己黄芪汤对肾 AQP14 表达的影响,以期为防己黄芪汤的临床应用和理论研究提供实验依据。1 材料与方法1.1材料 1.1.1实验动物Wistar 大鼠 70 只,SPF 级,雄性,体重(20020)g,购买于北京维通利华实验动物技术有限公司,动物许可证号 SCXK(京)2016-0006。1.1.2仪器与设备TE612-L 电子天平(梅特勒-托利台仪器上海有限公司),KDC-OHR 高速冷冻离心机(安徽中科中佳科技仪器有限公司),Spectra Max190 型酶标仪(美国,MD 公司),Imag
13、eQuant LAS 500 一体化成像仪(美国 GE 公司),BG-PS 电泳仪(生工生物工程(上海)股份有限公司),QuantStudioTM5 荧光定量PCR 仪(赛默飞)。1.1.3药品与试剂黄芪饮片购自安徽精诚本草中药饮片有限公司,批号为 20201001,防己饮片、炙甘草饮片、白术饮片购自北京同仁堂股份有限公司,批号分别为 20200801、20201001、20201201。Na、K、Cl 测试盒购自南京建成生物工程研究所,批号分别为 20211123、20211110、20211029。AQP1、AQP2 抗体、HRP-羊抗兔 IgG 均购自 博 士 德 公 司,批 号 分 别
14、 为ZP2009BP09、ZP2010BP10、BST16I26C16J54;AQP3、AQP4 抗体均购自 ABclonal,批号分别为 0058560102、0073660202。引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。1.2方法1.2.1气虚模型的建立实验前全部动物进行负重(在鼠尾缠绕约体重7%的铁丝)游泳,水温 202 ,筛选时长为 10 30 min 内的动物继续实验。按照数字随机法将大鼠分为两组,正常组和气虚模型组。其中正常组按常规喂养,不做任何处理;气虚模型组参照中药治疗脾虚证的临床研究指标原则4和 中医湿病学5,采用“游泳疲劳+饮食失节”复合因素诱导建立。具体操作为采用隔日
15、禁食、隔日给食及每日负重游泳,直至口鼻没入水中 34 s 捞出,连续 4 周。1.2.2防己黄芪汤的制备防己黄芪汤参照原书比例,按防己:黄芪:白术:甘草=4 5 3 2进行前煮,煎煮时再加入生姜、大枣。将药材以 10 倍体积的水浸泡 2 h,用武火煮沸,继续文火煎煮 30 min。第二次用 8 倍水体积浸泡,以相同方法煎煮,合并两次的过滤液,蒸馏浓缩至所需要的浓度。静置冷却后放入 4 冰箱保存备用。1.2.3实验分组与给药造模成功后,将 40 只气虚水负荷模型大鼠按照数字随机法分为 4 组,即模型组、防己黄芪汤低剂量组、防己黄芪汤中剂量组、防己黄芪汤高剂量组,每组 10 只。另设空白对照组 1
16、0 只。各组大鼠分别按2 mL/100 g 的灌胃体积进行灌胃。空白对照组、模型组大鼠灌服生理盐水;防己黄芪汤低、中、高剂量组分别灌服为 2.20、4.40、8.80 gkg-1的剂量防己黄芪汤,连续 7 天。1.2.4标本采集与保存每组大鼠按生理盐水 50 mL kg-1灌胃造成水负荷,30 min 后,收 集 每 小 时 尿 液,连 续 收 集 6 h。3 000 r min-1离心 15 min,取上清,进行尿 Na+、K+、Cl-含量 测 定 pH 值 的 测 定。尿 液 收 集 结 束 后 以10%水合氯醛麻醉各组大鼠,摘取肾脏,除去包膜,把一侧放入装有组织固定液的标本瓶中固定,以制
17、备病理切片;另一侧置于-80 冰箱保存,以备 Na+-K+-ATP 酶检测和 RNA 及蛋白质的提取。1.2.5肾 Na+-K+-ATP 酶活力的检测取肾组织放入匀浆管中,加入 0.9%的生理盐水作为匀浆介质,制成 10%的匀浆液,用低速离心机2 500 r min-1离心 10 min,取上清按说明书进行测定。1.2.6蛋白免疫印迹法检测大鼠肾组织 AQP14的蛋白表达取适量肾组织,加入蛋白裂解液,匀浆制备肾组织蛋白匀浆液,用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒检测蛋白浓度。稀释至同一浓度进行蛋白变性,上样,跑电泳,转膜,用含 5%脱脂奶粉的 TBST 封闭液进行封闭 2 h;加入含 AQP1、AQ
18、P2、AQP3、AQP4 一抗、-第 5 期高丽,等:防己黄芪汤对气虚水负荷模型大鼠的利尿作用及对肾脏 AQP14 表达的影响617 actin 内参的 TBST 稀释液进行 4 孵育过夜;摇床洗脱 3 次/10 min;加入含二抗(1 5 000)TBST 稀释液继续孵育 1 h,摇床洗脱 3 次/10 min;用化学发光试剂和一体化成像仪进行显影曝光,用 image-j 分析其灰度值。1.2.7Real Time-PCR 检测大鼠肾组织 AQP14的 mRNA 表达 取适量肾组织,按照 RNA 快速提取试剂盒提取RNA,用紫光分度计检测其浓度。稀释至同一浓度,按照试剂盒进行反转录实验,再进
19、行 Real-Time PCR扩增,实验步骤严格按照说明书进行。表 1AQP14 引物设计名称序列AQP1-FCCTGCTGGCGATTGACTACACTGAQP1-RTGGTTTGAGAAGTTGCGGGTGAGAQP2-FCTTCCTTCGAGCTGCCTTCTATGTGAQP2-RGCTGTGGCGTTGTTGTGGAGAGAQP3-FGCTGTCACCCTTGGCATCTTGGAQP3-RAGGAAGCACATTGCGAAGGTCACAQP4-FCAGCATCGCTAAGTCCGTCTTCTACAQP4-RACCGTGGTGACTCCCAATCCTC1.2.8统计学方法应用 SPSS
20、22.0 统计软件进行分析,各组数据服从正态分布用均数标准差(X-S)表示,组间差异的比较采用单因素方差分析,在方差齐的情况下,多组间比较采用 LSD-t 检验,方差不齐的情况下,用Dunnetts T3 作进一步的分析。以 P0.05 有统计学意义。2 结果2.1大鼠一般状况的观察空白对照组大鼠食欲好,反应灵敏,皮毛光泽,大便正常,一般情况良好。气虚模型组大鼠第 1 周开始出现食量下降,第 2 周出现倦怠少动、眼睛迷离、自主活动降低、蜷缩,皮毛少光;第 3 周开始出现皮毛干枯、蓬乱,粪便时软时溏;第 4 周时,大鼠身体瘦弱,精神不振,眯眼,弓背,爪色及耳色偏淡。大鼠体重、6 h 总尿量、游泳
21、时长结果见表 2。表 2气虚模型大鼠体重、尿量、游泳时长的情况(x-s)分组n体重/g6 h 总尿量/mL游泳时长/min空白对照组10365.9325.1711.121.9924.822.74气虚模型组40194.7313.84a4.351.65a11.632.58a注:与空白对照组比较,aP0.01。给药治疗后,与模型组相比,防己黄芪汤各组大鼠的食欲渐增、精神状态良好、粪便形态有所改善,皮毛不似之前干枯。与模型组比较,防己黄芪汤各组的体重有所增加,结果见表 3。表 3防己黄芪汤对气虚水负荷模型大鼠体重的影响(x-s,n=10)分组剂量/(g kg-1)体重/g空白对照组-377.1729.
22、20模型组-213.2718.04a防己黄芪汤低剂量组2.20218.1317.41a防己黄芪汤中剂量组4.40240.6119.69abc防己黄芪汤高剂量组8.80241.6219.40abc注:与空白对照组比较,aP 0.05;与模型组比较,bP0.05;与防己黄芪汤低剂量组比较,cP0.05。2.2对大鼠各时间点及 6 h 总尿量的影响与模型组比较,防己黄芪汤各剂量组在第 2 h的尿量明显增加(P0.05),中剂量组在第 2、3 h 的尿量明显增加(P0.05),高剂量组在第 2 h 至第 6 h 的尿量持续明显增加(P0.05)。与空白对照组比较,模型组、防己黄芪汤低、中剂量组 6 h
23、 总尿量明显减少(P0.05);防己黄芪汤高剂量组大鼠的 6 h 总尿量明显增加(P0.05)。与模型组比较,防己黄芪汤中、高剂量组大鼠的 6 h 总尿量明显增加(P0.05),结果见图 1。A:空白对照组,B:模型组,C:防己黄芪汤低剂量组,D:防己黄芪汤中剂量组,E:防己黄芪汤高剂量组;与空白对照组比较,aP0.05;与模型组比较,bP0.05;与防己黄芪汤低剂量组比较,cP0.05;与防己黄芪汤中剂量组比较,dP0.05。图 1防己黄芪汤对气虚水负荷模型大鼠的各时间点及 6 h 总尿量变化618 石河子大学学报(自然科学版)第 41 卷2.3对大鼠尿液 Na+、K+、Cl-含量和 pH
24、值的影响与空白对照组比较,模型组大鼠尿 Na+、K+、Cl-含量明显降低(P0.05),防己黄芪汤低剂量组大鼠的尿 Na+、Cl-含量明显降低(P0.05)。与模型组比较,防己黄芪汤中、高剂量组大鼠的尿 Na+、Cl-含量明显升高(P0.05);防己黄芪汤高剂量组大鼠的尿 K+含量明显升高(P 0.05),结 果 见图 2。A:空白对照组,B:模型组,C:防己黄芪汤低剂量组,D:防己黄芪汤中剂量组,E:防己黄芪汤高剂量组;与空白对照组比较,aP0.05;与模型组比较,bP0.05;与防己黄芪汤低剂量组比较,cP0.05;与防己黄芪汤中剂量组比较,dP0.05。图 2防己黄芪汤对气虚水负荷模型大
25、鼠尿液 Na+、K+、Cl-含量和 pH 的影响2.4对大鼠肾 Na+-K+-ATP 酶活力的影响与空白对照组比较,模型组大鼠肾 Na+-K+-ATP 酶活力明显降低(P0.05)。与模型组比较,防己黄芪汤中、高剂量组大鼠的肾 Na+-K+-ATP 酶活力明显升高(P0.05),结果见表 4。表 4防己黄芪汤对气虚水负荷模型大鼠肾Na+-K+-ATP 酶活力的影响(x-s,n=10)组别剂量(g/kg)Na+-K+-ATP 酶(U/mgprot)正常组-4.640.45模型组-3.190.61a防己黄芪汤低剂量组2.203.450.67a防己黄芪汤中剂量组4.404.390.52bc防己黄芪汤
26、高剂量组8.805.030.92bcd注:与空白对照组比较,aP 0.05;与模型组比较,bP0.05。2.5对大鼠肾组织病理的影响肾脏病理学观察显示,正常组及防己黄芪汤各治疗组大鼠皮质髓质分界明显;皮质肾小球分布均匀,肾小球中细胞数量以及基质均匀;髓质未见明显异常;肾间质无明显增生;未见明显的炎性改变。模型组大鼠的肾皮质局部可见少量肾近曲小管扩张,结果见图 3。2.6对大鼠肾组织 AQP1、2、3、4 蛋白表达的影响与空白对照组比较,模型组大鼠肾组织 AQP1、2、3、4 蛋白表达明显升高(P0.05)。与模型组比较,防己黄芪汤低剂量组大鼠肾 AQP1 蛋白表达明显降低;中、高剂量组大鼠肾
27、AQP1、2、3、4 蛋白表达明显降低(P0.05),结果见图 4 和图 5。图 3各组大鼠肾脏病理 HE 染色图片2.7对大鼠肾组织 AQP1、2、3、4 mRNA 表达的影响 与空白对照组比较,模型组大鼠肾 AQP1、2、3、4 mRNA 表达含量明显增高(P0.05)。与模型组比较,防己黄芪汤低剂量组大鼠肾 AQP2、3 mRNA表达含量明显降低(P0.05);中、高剂量组大鼠肾AQP1、2、3、4 mRNA 表达含量明显降低(P0.05)。见图 6。A:空白对照组,B:模型组,C:防己黄芪汤低剂量组,D:防己黄芪汤中剂量组,E:防己黄芪汤高剂量组。图 4各组大鼠肾组织 AQP1、2、3
28、、4 蛋白免疫印迹图第 5 期高丽,等:防己黄芪汤对气虚水负荷模型大鼠的利尿作用及对肾脏 AQP14 表达的影响619 A:空白对照组,B:模型组,C:防己黄芪汤低剂量组,D:防己黄芪汤中剂量组,E:防己黄芪汤高剂量组;与空白对照组比较,aP0.05;与模型组比较,bP0.05;与防己黄芪汤低剂量组比较,cP0.05;与防己黄芪汤中剂量组比较,dP0.05。图 5防己黄芪汤对气虚水负荷模型大鼠肾 AQP1、2、3、4 蛋白表达的影响A:空白对照组,B:模型组,C:防己黄芪汤低剂量组,D:防己黄芪汤中剂量组,E:防己黄芪汤高剂量组;与空白对照组比较,aP0.05;与模型组比较,bP0.05;与防
29、己黄芪汤低剂量组比较,cP0.05;与防己黄芪汤中剂量组比较,dP0.05。图 6防己黄芪汤对气虚水负荷模型大鼠肾 AQP1、2、3、4 mRNA 表达水平3 讨论本项目从方证相关角度对经典名方药效作用机制进行研究。方证相关是指一个方剂内的药味及其配伍关系与其针对的病证病机或病理环节之间具有高度相关性或针对性。方证相关强调了方药与其作用对象之间的相互作用,即方剂的功用是特定方药与其作用对象特定证之间相互作用的结果,方药-机体(病证)的密切关联是中医辨证论治中的重要特征。防己黄芪汤益气健脾、利尿消肿,正对气虚水肿之证。本实验采用单日禁食、双日给食结合约7%的负重游泳疲劳法制备气虚模型,再施以水负
30、荷刺激制备气虚水负荷模型大鼠,符合气虚水肿之中医证型。中医理论认为水液代谢是由肺、脾、肾等多脏腑参与的复杂生理活动,是脏腑生理功能的协调综合作用。现代医学研究发现 AQP 在肺、肾、消化系统等器官广泛分布,起到介导水跨膜转运的作用,是维持体内水液代谢平衡的分子学基础。这提示我们,将 AQP 与水液代谢密切的关系,与中医理论的肺、脾、肾等功能联系起来,可以为中医药的发展提供理论基础与实验依据。在肾组织中,已发现 9 种 AQP 分别在肾脏不同部位、不同细胞表达,以维持正常的尿液浓缩功能,组织发育和物质代谢等。研究最多的是 AQP1 4,它们是参与水的重吸收和尿液浓缩的主要通道6。AQP1 位于近
31、端小管上皮细胞的顶质膜、髓袢降支细段管腔膜及直小血管降部,负责肾小管水分子的重吸收,敲除掉 AQP1 的转基因小鼠,在肾近端小管对水的通透性降低,会阻碍肾小球滤过的水的重吸收,表现出多尿7-8。AQP2 位于集合管根尖和基底外侧膜及根尖下囊泡中,在维持水平衡、调节体液体积及渗透压方面起着至关重要的作用,是参与水重吸收的关键 AQP,AQP2 基因突变或缺陷会导致尿液浓度的缺陷9。AQP3 分布在集合管上皮细胞基底膜外侧,除了水外,AQP3 还能转运小分子,如甘油和尿素;AQP4 主要存在于集合管中,以内髓部分为主,参与水的重吸收和尿液的浓缩10-11。肾小管和集合管中 AQP 表达增多,则会有
32、大量的水重吸收,进而导致尿量的减少及尿液浓缩。而实验研究证实中医药治疗水液代谢紊乱方面的疾病可通过调节 AQP 的 表 达 来 实 现,如 车 前 子 提 取 物12、茯苓13通过下调 AQP1,AQP2 的表达实现利水作用;水栀子的利尿作用与下调 AQP2,AQP3 相关14;真武汤 通 过 下 调 肾 AQP2 的 表 达 改 善 水 液 失 衡 问题15;五苓散通过降低肾 AQP 1 4 的表达实现治疗水液代谢疾病16-19。防己黄芪汤源自金匮要略,是益气利水的经典名方,由祛风利水的防己和健脾利水的黄芪共为君药,伍以“健脾燥湿第一要药”白术,调和诸药的620 石河子大学学报(自然科学版)
33、第 41 卷炙甘草,佐加生姜、大枣而成。防己黄芪汤在临床上常用于治疗和气虚有关的水液代谢紊乱疾病,疗效突出。本实验研究结果显示,气虚水负荷模型大鼠肾 AQP 1、AQP2、AQP3、AQP4 mRNA 及蛋白含量高度表达,可能使肾脏水液重吸收功能加强,从而减少尿量、破坏电解质平衡,这可能是加速机体水肿发展的因素之一。而防己黄芪汤有显著的利尿作用,可能是通过下调肾 AQP 1、AQP2、AQP3、AQP4 mRNA和蛋白过度表达,促进水钠的排放,增加尿量而实现的。这些结果可为防己黄芪汤益气健脾、利水消肿的作用提供了实验依据,也可为进一步说明防己黄芪汤与气虚水肿证之间的方证相关提供理论依据。防己黄
34、芪汤药物组成不算复杂,但中药有效成分众多,有关该方化学成分方面的研究主要有陈萌等20采用 HPLC-UV/ELSD 进行了防己黄芪汤指纹图谱研究,关皎等21采用高效液相色谱法测定了防己黄芪汤中粉防己碱、防己诺林碱、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草苷、甘草酸和白术内酯6 种成分的含量。另有李燕子等22检测了防己黄芪汤中黄芪甲苷含量,刘幸平等23检测了防己黄芪颗粒剂中防己诺林碱、粉防己碱的含量。防己黄芪汤全方在体内的药物代谢动力学过程也尚不明确,主要研究成果集中于山西大学秦雪梅教授团队,他们采用 UH-PLC-Q-TOF-MS 分析了防己黄芪汤作用于阿霉素肾病大鼠的血浆样本,共鉴定出原型 25 种,代谢物
35、 50种,同时通过 DAS 2.0 软件拟合了防己黄芪汤中 20种原型及 6 种代谢物的药代动力学曲线,表明黄酮类及皂苷类化合物的达峰时间在 1 3 h,生物碱类化合物的达峰时间在 5 8 h,防己黄芪汤有效成分的半衰期为 6.619 h24。中药疗效确切,具有多成分、多靶点、整合调节的优势,但中药的药效物质基础及作用机理不明确使中药国际化受到很大限制。今后有关防己黄芪汤的研究也可在药物代谢方面开展,以探求防己黄芪汤在体内的动态规律,促进防己黄芪汤药效物质基础、药效作用机制的研究。参考文献(References)1 刘小龙,金钟大.麻黄连翘赤小豆汤合防己黄芪汤加减治疗原发性肾病综合征临床观察J
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43、 J X,BI Y,et al.Effects of semen plan-taginis extract on diuretic activity and renal aquaporins and ion channels in normal ratsJ.Chinese Journal of Hospital Pharmacy,2014,34(12):968-971.13李慧君,王天合,尤朋涛,等.不同产地茯苓对肾阳虚下焦水肿大鼠的利水渗湿作用研究J.中药新药与临床药理,2021,32(5):632-638.LI H J,WANG T H,YOU P T,et al.Study on the
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46、nal in-jury in spontaneously hypertensive ratsJ.Pharmacolo-gy and Clinical of Traditional Chinese Medicine,2021,37(5):17-21.16苟玉东.五苓散对水负荷大鼠利尿作用及与水通道蛋白-1 相关性的初步研究D.黑龙江:黑龙江中医药大学,2018.17陈国英.五苓散对水 负荷 大鼠 尿 量影 响及 与肾 脏AQP2 相关性的研究D.黑龙江:黑龙江中医药大学,2018.18陈利娜.五苓散干预肾阳虚水肿大鼠模型水液代谢及机制的实验观察D.黑龙江:黑龙江中医药大学,2019.19王玉碧.
47、基于 AQP3 观察五苓散对肾阳虚水肿模型大鼠水液代谢影响的实验研究D.黑龙江:黑龙江中医药大学,2019.20陈萌,李爱平,李科,等.防己黄芪汤 HPLC-UV/ELSD指纹图 谱 研 究 J.中 草 药,2017,48(13):2653-2659.CHEN M,LI A P,LI K,et al.Study on HPLC-UV/ELSD fingerprint of Fangji Huangqi Decoction J.Chinese Herbal Medicine,2017,48(13):2653-2659.21关皎,张颖,费雪,等.反相高效液相色谱法测定防己黄芪汤中 6 种活性成分的
48、含量J.吉林医药学院学报,2018,39(5):321-325.GUAN J,ZHANG Y,FEI X,et al.Determination of six active ingredients in Fangji Huangqi Decoction by RP-HPLCJ.Journal of Jilin Medical College,2018,39(5):321-325.22李燕子,颜学槐.不同配伍下防己黄芪汤中黄芪甲苷含量差异性分析J.中医药导报,2019,25(6):74-76.LI Y Z,YAN X H.Difference analysis of astragaloside
49、IV content in Fangji Huangqi Decoction with different compatibility J.Chinese Medicine Herald,2019,25(6):74-76.23刘幸平,程康华,毕肖林,等.HPLC 法测定防己黄芪颗粒剂中防己诺林碱、粉防己碱的含量J.南京中医药大学学报(自然科学版),2001,17(4):230-231.LIU X P,CHENG K H,BI X L,et al.Determination of tetrandrine and tetrandrine in Fangji Huangqi Granules by HPLC J.Journal of Nanjing University of Tradi-tional Chinese Medicine(Natural Science Edition),2001,17(4):230-231.24崔文博.防己黄芪汤的整合药物代谢动力学及其组织分布研究D.太原:山西大学,2021.(责任编辑:唐慧)
