1、基金项目:河北医学科学研究课题(编号:)作者单位:邯郸市中心医院胸外科(邯郸)作者简介:苗玲女()本科主治医师从事非小细胞肺癌的研究通信作者:苗玲 :.非小细胞肺癌患者肿瘤组织、的表达水平及临床意义苗玲 赵之寒 王敏【摘要】目的 探讨非小细胞肺癌()患者癌组织中蛋白酶体激活因子 及微小 ()表达水平与术后生存的相关性 方法 回顾性分析 年 月 年 月间接受手术治疗的 例 患者临床资料使用免疫组化法和 法测定其癌组织及癌旁组织标本中、表达情况并分析其与 患者病理特征的关系 术后随访 个月观察患者生存情况绘制 曲线分析癌组织中、表达对 患者预后的预测效果 结果 免疫组化法检测 组织中 表达水平显著
2、高于癌旁组织 法测定 相对表达量明显低于癌旁组织(.)癌组织中 表达与 呈负相关性(.)表达与肿瘤分化程度、分期、浸润深度及远处转移相关(.)表达与肿瘤病理类型、分化程度、分期、浸润深度及远处转移相关(.)曲线分析显示 表达预测生存率的 为.(:.)表达的 为.(:.)结论 组织中的 及 均存在异常表达情况且均与癌细胞分化程度、分期、浸润深度和远处转移等病理特征密切相关推测其共同参与了 的发生及进展过程可作为 早期诊断和靶向治疗的肿瘤标记物【关键词】非小细胞肺癌蛋白酶体激活因子 临床意义预后【中图分类号】【文献标识码】:./.【】()().(.).(.).(.)(处)标本各 例 纳入标准:()
3、所有研究对象均符合 制定的 诊断标准()完善术前准备术后经病理确诊为()年龄在 岁间者()患者对实验知情且自愿签署授权书 排除标准:()伴其他部位恶性肿瘤患者()伴肺部其他疾病者()临床资料不完整或术后失访患者 本研究经医院伦理委员会批准实施(批号:院审字:)例 患者中男性 例女性 例年龄 岁平均.岁依据国际抗癌联盟美国癌症联合委员会制定的实体瘤 分期第 版:期 例 期 例浸润深度:期 例 期 例分化程度:高分化 例中分化 例低分化 例病理分型:腺癌 例鳞癌 例转移情况:远处转移 例无转移 例.方法.实验试剂兔抗人 多克隆抗体、免疫组化试剂盒 、显色试剂盒 及 修复液购自北京中杉金桥生物 与阴
4、性对照(.)购自上海吉玛公司 试剂、脂质体 购自美国赛默飞世尔公司 引物及荧光定量()试剂盒购自日本 公司.免疫组化染色()法石蜡切片置于烤箱中 二甲苯脱蜡梯度乙醇脱水后行高压喷气 抗原热修复使用 过氧化氢甲醇配剂室温避光修复 封闭处理 滴加一抗(以 稀释)置于 冰箱过夜加二抗(均滴加生物素标记的羊抗兔)后置于烤箱()孵育 擦玻片加辣根酶标记的链酶卵白素工作液置于烤箱再孵育 显色:拭去组织周围液体后滴加 显色剂组织呈棕黄色后蒸馏水终止显色复染:苏木素染色 使用自来水冲洗 次盐酸酒精分化 组织呈粉色后再冲洗 次氨水返蓝后脱水最后封片染色结果判定:选择 个染色明显、无重叠、定位准确的高倍视野()癌
5、细胞、染色强度及染色细胞百分数先按照染色强度计分:无色为 分淡黄色为 分棕黄色为 分棕褐色为 分 再依据阳性细胞百分比评分:阳性细胞占比 计 分两项评分之积为 法总评分:分为“”分为“”分为“”分为“”取 个视野均值由两名资深病理科医师采用双盲法专职阅片再以两人的观察均值为判定结果.技术试验方法 法提纯组织总 将 总 依照反转录试剂盒中的操作步骤反转录成 采用 法采用 试剂盒逆转录试剂盒 逆转录以总 为模板将 通过 逆转录试剂盒合成 利用荧光 仪进行 逆转录加入 无核酸酶水(水)溶解 立即使用或 保存 按 逆转录试剂盒说明书进行 逆转录操作按 试剂盒说明书配制 反应体系 将混合好的 反应液加入
6、 孔板中封膜、离心并上机依据目的基因 登录的序列()应用 .版软件设计克隆引物所有引物均由 公司合成 及 引物序列见表 实用肿瘤学杂志 年第 卷第 期总第 期表 及 行 检测的引物序列 总反应体系 、上下游引物、生化试剂 、聚合酶.、浓度为 /的 .反应条件:扩增 个循环 延伸 反应条件:个循环 再以每 递增.行温度梯度退火 以 法计算 癌组织及癌旁组织中、相对表达量 重复 次取平均值.术后随访所有患者均在出院后通过电话、复诊、上门访视等形式进行随访 随访起始时间为 年 月随访时间 个月(截止时间 年 月)中位随访时间.个月 随访终点为患者死亡或随访截止日期 计算该组 患者总生存期()是指从出
7、院后因任何原因引起死亡的时间.统计学方法采用 .统计学软件处理实验数据满足正态分布的计量资料用()表示两组间行独立样本 检验组内采用配对样本 检验定量资料相关性采用 相关性分析绘制 曲线分析 及 表达与 患者预后的关系 回归分析 患者 的影响因素绘制 曲线 .为差异有统计学意义 结果.组织和癌旁组织中的 和 相对表达量免疫组化测定结果显示 在 癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织(图)法检测显示 癌组织中 相对表达量显著高于癌旁组织而 相对表达量则明显低于癌旁组织组间差异有统计学意义(.)(表)图 在 患者癌组织及癌旁组织中的表达()():.表 癌组织及癌旁组织中 及 相对表达量 .癌组织中 及
8、 表达与病理特征的相关性 相 关 性 分 析 显 示 组 织 中 表达与 呈负相关(.)(图)癌组织中 表达与分化程度、分期、浸润深度及远处转移相关(.)表达与病理类型、分化程度、分期、浸润深度及远处转移相关(.)(表)实用肿瘤学杂志 年第 卷第 期总第 期表 组织中 与 表达与病理特征的相关性 .().图 癌组织中 与 表达的相关性 .患者预后的影响因素分析单因素 回归分析结果显示分化、分期、浸润深度、远处转移、可能是 患者 的影响因素多因素 回归分析显示 分期、浸润深度、及 表达是 患者 的独立影响因素(.)(表)分期为 期、浸润深度 级、低表达及 高表达 患者 更长(图).癌组织中 与
9、表达对患者术后生存的预测效果 曲线分析显示 预测 患者生存情况的效果优于(图 表)图 癌组织中 与 相对表达量与生存率的 曲线 实用肿瘤学杂志 年第 卷第 期总第 期表 患者预后的影响因素分析 ()().(.).(.).(.).(.).(.).(.).(.).(.).(.).(.).(.).(.).(.).(.).(.)图 不同 分期、浸润深度、及 表达水平的 患者的 曲线 表 癌组织中 与 预测患者生存情况的效能 .时或 相对表达量.时 患者的预后死亡风险较高本研究也存在一些局限性首先纳入的样本量不足导致实验结果可能存在偏倚其次未分析抑癌基因 对 组织中 的调控关系希望在之后的实验中扩大样本
10、量深入挖掘 癌细胞中 及 的生物特性为患者的诊断和治疗提供指导综上所述 组织与癌旁组织中的 及 表达均存在显著差异且该两种生物标记物与癌细胞分化程度、分期、浸润深度和远处转移均相关联可能共同参与了 的发生和进展因此有可能作为 早期诊断和靶向治疗的肿瘤标记物参考文献 .:.():.李琳.、及 在喉癌组织中的表达特征及意义.石家庄:河北医科大学.黄剑庞慧宋雨航.在乳腺癌耐药中的作用.实用肿瘤学杂志():.:.胡洪林.通过靶向抑制 表达减弱人非小细胞肺癌的增殖和侵袭能力.临床肺科杂志():.朱瑶瑶胡敏徐清华等.血清吲哚胺 双加氧酶与早期非小细胞肺癌立体定向放射治疗预后的相关性.中华放射医学与防护杂志
11、():.刘光峨马虎.非小细胞肺癌免疫治疗相关生物标记物的研究进展.山东医药():.姜战胜张宇任秀宝等.晚期非小细胞肺癌一线生物靶向治疗的研究进展.中国肿瘤生物治疗杂志():.():.().():.路选陈飞王颖等.对乳腺癌细胞阿霉素耐实用肿瘤学杂志 年第 卷第 期总第 期药性的逆转作用及机制.山东医药():.张晓红南琼.在结直肠癌中的研究进展.胃肠病学():.洪永刚郑浩黄智平等.在结直肠癌组织的表达及其对结直肠癌细胞增殖凋亡能力的影响.消化肿瘤杂志:电子版():.():.亓龙何薇.蛋白酶体激活因子 对未分化甲状腺癌细胞摄碘功能的影响.中华核医学与分子影像杂志():.石远.靶向 抑制人乳腺癌细胞增殖及促进细胞凋亡研究.重庆:重庆医科大学.:.():.():.(收稿日期:修回日期:)关于关键词的标引论文中需标注 个关键词请务必使用美国国立医学图书馆编辑的最新版 医学主题词表()内所列出的词也可以通过上网查检索词 如 上尚无相应的主题词处理办法:()选用直接相关的几个主题词进行组配()选用约定俗成的词组或已被本研究领域广泛认同的自由词 中英文关键词不能缩写必须给出全文如“”应标注为“小细胞肺癌”和“”本刊编辑部实用肿瘤学杂志 年第 卷第 期总第 期
