1、中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 70 肺泡灌洗液细胞因子系列检测联合肺泡灌洗液淋巴细胞免疫分析对呼吸机相关性肺炎早期诊断的意义 韩雪霖 孙显臣（通讯作者）潍坊市第二人民医院，山东 潍坊 261041 摘要：摘要：目的 分析肺泡灌洗液细胞因子系列检测联合肺泡灌洗液淋巴细胞免疫分析对呼吸机相关性肺炎早期诊断产生的作用。方法 选择我院 2021 年 1 月至 2023 年 1 月患者为研究对象（n=102,行气管插管、机械通气者),插管后，机械通气后 48 小时至 96 小时内，对患者行床旁支气管镜检查，留取肺泡灌洗液，进行细胞因子系列检测和淋巴细胞免疫分析，并留取外周血标本，行血常规检查，如
2、果发生呼吸机相关性肺炎的患者，则当作为观察组，没有发生的患者，当作为对照组，对两组患者进行对比分析。结果 观察组和对照组具有明显差异（P0.05）。结论 肺泡灌洗液细胞因子系列检测联合肺泡灌洗液淋巴细胞免疫分析能够提供有效依据，从而提早干预，明显改善呼吸机相关性肺炎患者的预后。关键词：关键词：肺泡灌洗液细胞因子；肺泡灌洗液淋巴细胞亚群；呼吸机相关性肺炎；机械通气 中图分类号：中图分类号：R563 呼吸机相关性肺炎（VAP）是指机械通气四十八小时以后发生的肺炎，这是 ICU 最常见的获得性感染，发病率在百分之五至百分之四十之间。有研究发现，存在呼吸机相关性肺炎的患者病死率在百分之三十至百分之七十
3、之间1。呼吸机相关性肺炎诊断难度较大，并且也存在一定争议。活检肺组织培养是呼吸机相关性肺炎诊断金标准，但是具有创伤性，并且取材难度较大，会直接影响早期用药。目前，随着流式细胞技术的发展和广泛应用，检测血清细胞因子及淋巴细胞亚群已经成为辅助诊断感染性疾病的重要方式，且具备较高的敏感性。将血清相关检测应用于诊断呼吸机相关性肺炎虽然具有一定诊断效果，但还是会受到干扰，导致诊断特异性不高。支气管肺泡灌洗技术在临床上被重视，具有无创性优势，安全性较高，能够直接从呼吸道和肺泡表面留取分泌物，在炎症有关物质释放入血前就能取到相关检测标本，并且干扰较少，具有较高敏感度及特异性2-3。当前，临床上应用流式细胞技
4、术对肺泡灌洗液进行细胞因子系列检测及淋巴细胞亚群免疫分析应用已经完善，但是应用频率不高，诊断经验不足，缺乏临床客观数据支撑。此次研究则分析肺泡灌洗液细胞因子系列检测及肺泡灌洗液淋巴细胞免疫分析情况，从而促使呼吸机相关性肺炎患者能够及时、准确治疗，在很大程度上改善患者整体预后。详细见下文。1 资料与方法 1.1 一般资料 选择我院 2021 年 1 月至 2023 年 1 月患者为研究对象（n=102,行气管插管、机械通气者),插管后，机械通气后 48 小时至 96 小时内，对患者行床旁支气管镜检查，留取肺泡灌洗液，进行细胞因子系列检测和淋巴细胞免疫分析，并留取外周血标本，行血常规检查，如果发生
5、呼吸机相关性肺炎的患者，则当作为观察组，没有发生的患者，当作为对照组，对两组患者进行对比分析。对象一般资料：观察组 20 例，对照组 82 例。观察组男有 11 例，女有 9 例，年龄范围 42 岁至 77 岁，平均年龄 50.022.13 岁。对照组男有 42 例，女有 40例，年龄范围在 40 岁至 79 岁，平均年龄是 50.042.15 岁。纳入标准：家属，患者均知情同意。四十八小时内行经口或者经鼻气管插管，持续有创呼吸机辅助呼吸。排除标准：年龄十八岁以下、八十岁以上。机械通气前已被诊断为肺炎，及接受机械通气治疗四十八小时内已出现肺炎。合并自身免疫性疾病、HIV、肺结核等疾病。病情危重
6、，预计观察时间不足96 小时。1.2 方法 在患者实施气管插管、机械通气后 48 小时至 96小时内，进行床旁支气管镜检查，做好无菌操作，避免污染，经气管插管进支气管镜至段支气管开口处，注入生理盐水 10-20mL，负压吸引，将肺泡灌洗液吸到无菌中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 71 集痰器中，以 1500r/min 离心 5min，取上清液利用流式细胞仪测定淋巴细胞亚群，采取酶联免疫吸附法测定细胞因子。同时留取该患者外周血标本，在患者实施气管插管、机械通气后 48 小时至 96 小时内，清晨空腹经肘脉静脉采血 3ML,离心处理后采用 DNM-9606 酶标分析仪检测。1.3 观察指标 分
7、析两组体温。分析两组外周血白细胞计数（WBC）。分析两组肺泡灌洗液细胞因子系列检测。主要包括：IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、TNF-、INF-y。分析两组肺泡灌洗液淋巴细胞免疫水平。主要包括：LYM%、CD3-CD19+BCell%、CD3+CD4+TCell%、CD3+CD8+TCell%、CD3-CD（16+56）+NK Cell%。1.4 统计学方法 用统计学软件 SPSS22.0 进行分析，连续性变量中服从正态分布的计量资料，用（x s）代表，组间对比用 t 验证，计数资料用（%）代表，组间对比用 x2验证，检验水准 0.05，以 P0.05 表示差异有统计学意
8、义。2 结果 2.1 分析两组体温 得出结果，观察组更高（P0.05）。如表 1。2.2 分析两组外周血白细胞计数 得出结果，观察组更高（P0.05）。如表 2。表 1 分析两组体温 （x s）组别 例数 平均体温 观察组 20 38.670.64 对照组 82 36.370.23 t-3.570 P-0.012 表 2 分析两组外周血白细胞计数（x s）组别 例数 外周血白细胞计数（109/L）观察组 20 15.356.13 对照组 82 7.131.10 t-5.896 P-0.012 2.3 分析两组血清细胞因子水平 得出结果，观察组更高（P0.05）。如表 3。2.4 分析两组肺泡灌
9、洗液淋巴细胞免疫水平 得出结果，观察组更高（P0.05）。如表 4。3 讨论 呼吸机相关性肺炎是呼吸道、消化道的致病菌随污染分泌物进入到下呼吸道，导致的继发感染。正常人的上呼吸道是存在一些正常的非致病性菌，比如：草绿色链球菌群、嗜血菌属和厌氧菌等。由于存在解剖屏障、咳嗽反射、纤毛清除机制、机体固有细胞和体液免疫功能(如白细胞、免疫球蛋白)，健康人的呼吸道很少发现需氧革兰氏阴性菌，如铜绿假单胞菌、变形杆菌、不动杆菌等。而对于重症患者，尤其是经气管插管接受机械通气的患者，一方面可能是因为许多影响宿主防御机制的因素，包括：并发症、营养不良、黏膜免疫球蛋白A 的水平降低、蛋白酶产物增加、黏膜层暴露与侵
10、蚀、气道 pH 值升高、前期抗生素使用等，有关的气道细菌数目增加，导致口咽部的菌群发 表 3 分析两组血清细胞因子水平（s）组别 例数 IL-2（pg/mL)IL-4（pg/mL)IL-6（pg/mL)IL-10（pg/mL)IL-17（pg/mL)TNF-（pg/mL)INF-y（pg/mL)观察组 20 101.2410.23 98.2415.46 40.173.27 78.4910.35 107.3519.23 121.3529.65 465.20100.12 对照组 82 58.7710.13 60.1213.25 10.022.46 14.466.35 56.3512.36 70.3
11、410.34 670.23177.35 t-27.684 19.674 17.857 27.574 34.784 32.079 20.088 P-0.001 0.001 0.001 0.001 0.001 0.001 0.001 表 4 分析两组肺泡灌洗液淋巴细胞免疫水平（s）组别 例数 LYM%CD3-CD19+BCell%CD3+CD4+TCell%CD3+CD8+TCell%CD3-CD（16+56）+NK Cell%观察组 20 56.354.37 16.890.57 19.340.42 13.460.40 37.346.12 对照组 82 23.562.13 27.112.18 28
12、.352.67 27.792.77 14.672.14 t-16.574 18.964 7.895 10.011 12.010 P-0.001 0.001 0.001 0.001 0.001 中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 72 生巨大变化，出现革兰氏阴性菌和金黄色葡萄球菌等。另一方面由于建立人工气道破坏了呼吸道、会厌和声门的防御功能，即下呼吸道自我保护能力丧失，极易导致口咽部污染分泌物以及胃内容物的误吸发生，尤其意识障碍、胃食管反流、咽反射迟钝及不正常的吞咽功能，均极大增加误吸风险4。侵犯的病原体向下气道渗透和定植，导致本已受损的肺细胞免疫和体液免疫机制再受到破坏，最终导致呼吸机相关性
13、肺炎发生。呼吸机相关性肺炎会导致患者脱离呼吸机困难，延长住院的时间，病情严重者可能会危及生命，需要引起高度重视，积极做好呼吸机相关性肺炎的早期检查5。支气管肺泡灌洗技术是在纤维支气管镜基础上发展起来的一项新技术。支气管肺泡灌洗术是应用纤维支气管镜进行支气管肺泡灌洗，采取肺泡表面衬液进行炎症与免疫细胞及可溶性物质检查的方法6-7。利用支气管肺泡灌洗液进行细胞学、微生物学、寄生虫学和免疫学等方面的各项检验，对一些下呼吸道疾病和诊断、病情观察和预后判断开辟了一条新途径8-9。支气管肺泡灌洗术检测细胞因子，行淋巴细胞免疫分析，有利于为呼吸机相关性肺炎早期诊断提供参考依据，从根本上降低呼吸机相关性肺炎发
14、生率。支气管肺泡灌洗技术即直接从呼吸道和肺泡表面留取标本，在炎症有关物质释放入血前，即能够取到检测标本，受到的干扰较少，能够高效反应机体状况10。此次研究分析肺泡灌洗液细胞因子系列检测联合肺泡灌洗液淋巴细胞免疫分析对呼吸机相关肺炎早期诊断产生的作用。结果发现，呼吸机相关性肺炎患者体温明显高于对照组（P0.05）为差异显著，有统计学意义。呼吸机相关性肺炎临床表现为发热、痰多、呼吸困难等，在检测时会发现体温往往在 38以上。通过支气管肺泡灌洗技术检测发现，呼吸机相关性肺炎患者外周血白细胞计数明显高于对照组（P0.05）为差异显著，有统计学意义。外周白细胞在人体的免疫系统中起着重要的作用，会在血液中
15、寻找入侵的病毒、细菌和真菌等。当外来病原菌进入血液时，白细胞会在入侵病原菌引起疾病之前识别并摧毁该病原菌。白细胞计数高本身并不是一种特定的疾病，但它可能表明存在潜在的问题，例如感染、压力、炎症、外伤、过敏或某些疾病。呼吸机相关性肺炎患者外周血白细胞计数增高，能直接提示感染存在。通过支气管肺泡灌洗技术检测发现，呼吸机相关性肺炎患者 IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、TNF-、INF-y 水平明显高于对照组（P0.05）为差异显著，有统计学意义。IL-2 为白细胞介素-2，对机体免疫应答和抗病毒感染有重要作用。IL-4 为白细胞介素-4，在炎症和自身免疫性疾病。IL-6 为白细
16、胞介素-6，是一种重要的促炎细胞因子，在感染或组织损伤过程中释放，促进先天和获得性免疫反应11。IL-10 为白细胞介素-10，是一种抗炎细胞因子，能够在多种类型细胞中发挥免疫抑制和免疫刺激作用。IL-17 为白细胞介素-17，作用于各种细胞靶标，导致细胞活化。IL-17 对内皮细胞的作用导致炎症和促凝血活性。TNF-为肿瘤坏死因子，是由巨噬细胞分泌的一种小分子蛋白。肿瘤坏死因子-如果出现增高，通常说明患者体内可能存在炎症反应或者肿瘤病变。INF-y 为 Y 干扰素，IFN-的异常表达和很多自身炎症和自身免疫疾病相关。IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、TNF-、INF-y
17、细胞因子均能够作为呼吸相关性肺炎的诊断指标。通过支气管肺泡灌洗技术检测发现，呼吸相关性肺炎患者LYM%、CD3-CD19+BCell%、CD3+CD4+TCell%、CD3+CD8+TCell%、CD3-CD（16+56）+NK Cell%明显高于对照组（P0.05）为差异显著，有统计学意义。LYM 是淋巴细胞，主要存在于淋巴管中循环的淋巴液里,是人体免疫应答功能的重要细胞成分。淋巴细胞偏高可能是病毒性感染等。CD3-CD19+代表总 B 淋巴细胞，该数值偏高常见于炎症感染、恶性肿瘤、自身免疫性疾等。D3+CD4+TCell%偏高，考虑患者存在病毒感染疾病等。CD3+CD8+TCell%偏高，
18、可能为免疫系统类疾病。CD3-CD（16+56）+NK Cell%偏高，可能是免疫力低、病毒感染、细菌感染、肿瘤疾病所导致。检测发现，呼吸相关性肺炎患者 LYM%、CD3-CD19+BCell%、CD3+CD4+TCell%、CD3+CD8+TCell%、CD3-CD（16+56）+NK Cell%均偏高。LYM%、CD3-CD19+BCell%、CD3+CD4+TCell%、CD3+CD8+TCell%、CD3-CD（16+56）+NK Cell%数值能够作为呼吸相关性肺炎的参考指标。综上所述，肺泡灌洗液细胞因子系列检测联合肺泡灌洗液淋巴细胞免疫分析对呼吸机相关性肺炎早期诊断具有重要意义，能
19、够为呼吸机相关性肺炎早期诊断提供参考依据，从而提早干预，明显改善呼吸机相关性肺炎患者的预后。参考文献 1张智楠.支气管肺泡灌洗技术在儿童重症肺炎支原中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 73 体 肺 炎 中 的 应 用 效 果 J.中 国 当 代 医药,2022,29(32):123-126.2侯婧,王华,刘盛盛.基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术检测支气管肺泡灌洗液对涂阴或无痰肺结核的诊断价值J.实用医学杂志,2022,38(13):1599-1603.3孟现林,张蕾,范骁钦,等.宏基因组二代测序技术检测支气管肺泡灌洗液中病原体对器官移植患者肺部感 染 的 诊 断 价 值 J.中 华 危
20、重 病 急 救 医学,2021,33(12):1440-1446.4刘翔腾,王桂兰,黄娟,等.快速现场评价技术在指导儿童重症肺炎支气管肺泡灌洗后续诊疗价值的初步评价J.临床肺科杂志,2021,26(11):1672-1676.5萨日娜,王爱琼,李晓安,等.支气管肺泡灌洗技术在儿童重症支原体肺炎中的临床应用研究J.中国内镜杂志,2020,26(09):79-85.6刘亚芹,陈焕民,陈鸣.LAMP 技术检测支气管肺泡灌洗液在疑似肺结核中的诊断价值J.标记免疫分析与临床,2020,27(06):1037-1039.7何斌,董晓丽,贺钢枫.PCR-荧光探针技术结合支气管肺泡灌洗在肺结核病诊断的应用J.
21、内蒙古医学杂志,2019,51(02):215-216.8赵志伟.支气管肺泡灌洗液用量对重症肺炎患者病原 学 检 测 结 果 的 影 响 J.临 床 肺 科 杂志,2018,23(08):1386-1389.9左艳.支气管肺泡灌洗治疗支气管扩张合并感染患者的临床疗效J.中国民康医学,2018,30(11):100-102.10索南吉.支气管肺泡灌洗技术对急性呼吸衰竭患者肺功能 呼吸动力学及氧代谢的影响J.宁夏医科大学学报,2018,40(05):562-565.11 Wiedermann F,Lederer W.Inflammatory factors in alveolar lavage fluid from severe COVID-19 pneumonia:PCT and IL-6 in epithelial lining fluid.J.Open medicine(Warsaw,Poland),2021,16(1):1132-1133.基金项目：基金项目：潍坊市卫健委科研项目，肺泡灌洗液细胞因子系列检测联合肺泡灌洗液淋巴细胞免疫分析对呼吸机相关性肺炎早期诊断的意义（WFWSJK-2022-021）。
