1、66上海医药 2023年 第44卷 第21期（11月上）药物研发分光光度法测定猪凝血酶稀释剂中氨丁三醇含量余双英1,2 刘璐2 张军东1（1.上海昊海生物科技股份有限公司 上海 201613；2.上海利康瑞生物工程有限公司 上海 201707）摘 要 目的：建立一种猪凝血酶稀释剂中氨丁三醇含量测定方法，并进行方法学验证。方法：采用紫外-可见分光光度法在 620 nm 波长处测定吸光度，建立回归方程，计算氨丁三醇的含量。结果：该方法专属性较强，标准曲线的线性范围在 0.579 31.737 9 mg/mL；低、中、高 3 个浓度水平的总平均回收率为 98.72%（n=9），RSD 为 1.46%
2、（n=9）；精密度和中间精密度的总平均值为 1.140 5 mg/mL（n=12），RSD 为 3.59%（n=12）；3 批样品的氨丁三醇含量均符合要求。结论：该方法准确度、精密度、稳定性、耐用性良好，可用于猪凝血酶稀释剂中氨丁三醇含量测定。关键词 分光光度法 猪凝血酶稀释剂 氨丁三醇中图分类号：R927.11;R937.1 文献标志码：A 文章编号：1006-1533(2023)21-0066-04引用本文 余双英,刘璐,张军东.分光光度法测定猪凝血酶稀释剂中氨丁三醇含量 J.上海医药,2023,44(21):66-69.Determination of trometamol in por
3、cine thrombin diluent by spectrophotometryYU Shuangying1,2,LIU Lu2,ZHANG Jundong1(1.Shanghai Haohai Biological Technology Co.,Ltd.,Shanghai 201613,China;2.Shanghai Likangrui Biological Engineering Co.,Ltd.,Shanghai 201707,China)ABSTRACT Objective:A method by spectrophotometry was established to dete
4、rmine the trometamol in porcine thrombin diluent and methodological validation was performed.Methods:The absorbance was determined at the wavelength of 620 nm by UV-Vis spectrophotometry.The regression equation was established to calculate the content of tromethamine.Results:The method had strong sp
5、ecificity and the standard curve was linear over the range of 0.579 3-1.737 9 mg/mL.The overall average recovery at low,medium and high levels was 98.72%(n=9)with the overall RSD value 1.46%(n=9).The overall mean value of precision and mid-precision was 1.140 5 mg/mL（n=12）with RSD 3.59%(n=12).The co
6、ntent of trometamol in three batches of samples met the requirements.Conclusion:This method was suitable for the determination of trometamol in porcine thrombin diluent with good accuracy,reproducibility,stability and ruggedness.KEY WORDS spectrophotometry;porcine thrombin diluent;trometamol猪源纤维蛋白黏合
7、剂在临床常用于手术中辅助止血，该产品生物相容性好、无毒无刺激，能有效黏附于创口起到良好的止血和促进创口愈合的作用1-3。猪源纤维蛋白黏合剂主要是由猪纤维蛋白原、猪凝血酶及相应的稀释剂组成的一种复合制剂，氨丁三醇作为猪凝血酶稀释剂的一种重要辅料，根据相关要求需控制其含量。因此，建立一种适合本产品中氨丁三醇含量的测定方法尤为重要。国家药品标准 标准号：WS-10001-(HD-0467)-2002氨丁三醇注射液4和中华人民共和国药典2020 年版四部药用辅料氨丁三醇中的含量测定均采用滴定法：以甲基红做指示剂，用盐酸滴定液（0.1 mol/L）滴定。但是在猪凝血酶稀释剂制备过程中添加了稀盐酸调节产品
8、的 pH，盐酸会对最终滴定结果有干扰，故排除滴定法。氨丁三醇属带邻位的多羟基醇，相对分子质量较小，且没有紫外吸收，但能够在强碱条件下与氢氧化铜发生络合反应，生成深蓝色的氨丁三醇铜溶液，利用紫外-可见分光光度法测定络合物的吸光度，从而计算出氨丁三醇的含量。已有文献5-6采用紫外-可见分光光度法测定不同产品中氨丁三醇的含量，但本品中除氨丁三醇外还有其他一些对测定产生干扰的组分，不适合用于本品中氨丁三醇的测定。因此，本研究针对公司产品特点，作者简介：余双英，硕士，工程师。主要从事药品研发工作 67上海医药 2023年 第44卷 第21期（11月上）药物研发对测定方法中采用的波长、硫酸铜及氢氧化钠溶液
9、的浓度或用量、离心转速等条件均进行了改进，最终建立的方法操作简单，结果准确，并经过了方法学验证。1 材料与方法1.1 样品与试剂猪凝血酶稀释剂（公司自产）；氨丁三醇对照品（中国食品药品检定研究院）；硫酸铜、氢氧化钠、盐酸（分析纯级，上海凌峰化学试剂有限公司）；氯化钙（药用级，广东省台山市新宁制药有限公司）。1.2 仪器与设备紫 外-可 见 分 光 光 度 计（Cary 60，Aglient Technologies）；ME104 和 ME1002 分 析 天 平、S220 pH计 梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）；H1650 台式高速离心机（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）。1.3 溶液配
10、制1）氢氧化铜悬浊液 在 10 mL 离心管中分别依次加入 5%氢氧化钠溶液 3.5 mL 和 15%硫酸铜溶液 0.3 mL，立即振荡混匀，即得氢氧化铜悬浊液（需现配现用）。2）对照品储备液（24 mg/mL）精密称取对照品氨丁三醇 0.6 g 于 25 mL 容量瓶中，加水溶解后，稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。3）线性溶液 分别精密量取 0.25、0.40、0.50、0.60、0.75 mL 对照品储备液于 10 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得一系列质量浓度分别为 0.60、0.96、1.20、1.44、1.80 mg/mL 的线性溶液。4）供试品储备液（24 mg/mL
11、）精密称取氨丁三醇0.6 g，置于 25 mL 容量瓶中，加少量与凝血酶稀释剂中相同浓度的氯化钙溶液（45 mmol/L）溶解后，然后用氯化钙溶液稀释至刻度，摇匀，作为供试品样品储备液。1.4 检测波长制备 4 组氢氧化铜悬浊液，各组中分别加入 3 mL空白溶液（纯化水）、3 mL 空白基质（不含氨丁三醇的凝血酶稀释剂）、3 mL 对照品溶液（1.20 mg/mL）和 3 mL 供试品溶液，立即振荡混匀，于 10 000 r/min 离心 5 min，取上清液再次于 10 000 r/min 离心 5 min，然后取上清液于 400 800 nm 波长下进行全波段扫描，确定检测波长。1.5 回
12、归方程取 5 份氢氧化铜悬浊液，分别加入上述不同质量浓度的线性溶液 3 mL，立即振荡混匀，于 10 000 r/min 离心 5 min，取上清液重复离心一次，然后取上清液在 620 nm 波长下测吸光度，并以纯化水为空白对照。以吸光度对氨丁三醇浓度作线性回归，求得回归方程。2 结果2.1 检测波长的选择对照品和样品溶液在 620 nm 处具有最大吸收，而空白溶液和空白基质在该波长下基本没有紫外吸收（图1），表明此波长下测定的专属性较好，故选择 620 nm 为测定波长。图1 全波段扫描图2.2 线性回归方程经计算得线性回归方程为 y=0.100 6x+0.011 9，相关系数 r=0.99
13、8 5，说明氨丁三醇对照品溶液在 0.579 3 1.737 9 mg/mL 范围内，氨丁三醇浓度和吸光度线性关系良好。2.3 准确度分别制备浓度为 70%、100%、130%的样品液各 3份进行测定，结果显示其平均回收率分别是 100.21%、98.36%、97.59%；9 份样品液的平均回收率为 98.72%（n=9），RSD 为 1.46%（n=9）（表 1），表明回收率较好。2.4 精密度（重复性/中间精密度）两位研究人员于不同日期各测定供试品溶液 6 份，测得氨丁三醇含量的平均值分别为 1.166 4 mg/mL、1.114 6 mg/mL（n=6）；12 份 样 品 的 平 均 值
14、 为 1.140 5 mg/mL68上海医药 2023年 第44卷 第21期（11月上）药物研发（n=12），RSD 为 3.59%（n=12），结 果 满 足 内 控 标 准（RSD 5.0%）。2.5 溶液稳定性对照品和供试品溶液于室温放置 0 或 24 h，测定结果显示，两时间氨丁三醇含量测定结果的比值均满足内控标准（95.0%105.0%）（表 2），表明对照品和供试品溶液的稳定性良好。2.6 耐用性在其他条件不变的情况下，分别调整离心转速为（10 000500）r/min、检测波长为（6202）nm、氢氧化钠浓度为 5%0.5%，氨丁三醇含量与正常条件下测得的结果比值均在 95.0%
15、105.0%（表 3），表明该方法耐用性良好。2.7 供试品检测取 3 批 猪 凝 血 酶 稀 释 剂（批 号 20201101、20201201、20201203），测得其氨丁三醇含量分别为1.183 2 mg/mL、1.201 4 mg/mL、1.167 9 mg/mL，说 明该方法适用于猪凝血酶稀释剂中氨丁三醇含量测定。3 讨论1）离心条件的选择 在建立方法过程中比较了离心条件分别为 8 000 r/min 离心 2 次（5 min/次）、10 000 r/min 离心 1 次（5 min/次）和 10 000 r/min 离心 2 次（5 min/次，第一次离心后取上清液再次离心）对离
16、心效果的影响，结果发现，前两种离心方式均会有少量片状沉淀漂浮在上层清液中，对测定结果产生干扰；而第三种离心效果相对较好，沉淀与上清液能够完全分离，从而使测定结果更加准确。2）氢氧化铜悬浊液的制备 本方法根据产品特点，参考文献6调整了氢氧化钠和硫酸铜的用量，由于氢氧化铜悬浊液不稳定，需现配现用，且加入供试品溶液后需立即震荡混匀，否则氢氧化铜易分解产生黑色氧化铜沉淀，干扰测定结果。方法改进后，采用紫外-可见分光光度法测定猪凝血酶稀释剂中氨丁三醇含量，方法简单、专属性强，且线性、精密度、准确度较好，样品中其他成分不干扰测定结果，是比较理想、便捷的一种含量测定方法。参考文献1 刘璐,赵莹莹,张军东.气
17、相色谱法测定猪凝血酶冻干粉中磷酸三丁酯残留量 J.上海医药,2017,38(21):76-80.2 孟志云,窦桂芳,卜凤荣.纤维蛋白粘合剂的研究进展 J.中国输血杂志,2002,15(2):143-145.表1 准确度测定样品加入量/mg测得量/mg回收率/%平均回收率（n=3）/%总平均回收率（n=9）/%RSD（n=9）/%R70%-12.504 52.515 9100.46100.2198.721.46R70%-22.493 699.58R70%-32.519 1100.59R100%-13.577 83.538 298.8998.36R100%-23.471 397.02R100%-3
18、3.547 899.16R130%-14.651 14.576 498.3997.59R130%-24.560 598.05R130%-34.480 996.33表2 溶液稳定性样品名称放置时间/h 氨丁三醇浓度/(mgmL-1)比值/%对照品溶液01.201 0100.00241.189 199.01供试品溶液01.132 5100.00241.089 297.89表3 耐用性试验试验条件参数设置氨丁三醇浓度/(mgmL-1)比值/%离心转速10 000 r/min1.114 6100.00 9 500 r/min1.158 9103.9710 500 r/min1.119 4100.43检
19、测波长620 nm1.093 1100.00618 nm1.098 4100.48622 nm1.099 5100.58氢氧化钠浓度5%1.114 6100.004.5%1.141 2102.395.5%1.111 099.6769上海医药 2023年 第44卷 第21期（11月上）药物研发3 张丽铃,何淑琴,邓志华.纤维蛋白胶的临床应用进展 J.实用医药杂志,2014,31(5):451-452.4 国 家 药 品 监 督 管 理 局.国 家 药 品 标 准 WS-10001-(HD-0467)-2002 氨丁三醇注射液 EB/OL.2022-09-16.https:/ 潘爱萍.分光光度法测
20、定酸碱调节剂中氨丁三醇的含量J.海霞药学,2010,22(9):58-60.6 秦香芹,葛炳艳.分光光度法测定氨丁三醇注射液含量 J.黑龙江医药,2012,25(3):346-347.（收稿日期：2022-09-16）业许可要求等的情况，给予预警等风险提示，加强针对性监管。三是市局药品监管系统与市场局监管系统数据的联合共享。药品零售连锁企业因资本、人员等原因，企业资产重组的情况时有发生。企业资产重组先变更的是营业执照，该数据产生于市场局监管系统，在药品经营企业已完成涉及重组的营业执照变更的情况下，大数据平台应能提示药品监管系统，便于药品监管机构持续关注企业的变更情况。3.4 引导药品零售连锁企
21、业向规模化、集约化发展常规检查存在严重缺陷的小型药品零售连锁企业，自成立起，连锁经营规模就在小型和中小型间徘徊，没有自营的配送中心，药品的储存和配送均委托第三方企业。小型药品零售连锁企业在监管中存在严重缺陷，从侧面也反映了药品流通行业中小型连锁企业的艰难。我国药品流通行业竞争同质化高，小型药品零售连锁企业在和低利率、低费用率、以量驱动的大型甚至超大型企业的竞争中举步维艰9。药品零售连锁企业具备一定的规模才能吸引更多的资金投入，才能有更多的人才加入。为了减少药品连锁行业重复开办药品零售连锁企业带来的资金、精力的消耗，药品监管机构和行业组织应一同引导药品连锁企业向规模化、集约化、差异化竞争的方向发
22、展。4 结语在药品监管机构和行业组织的推动和引导下，我国药品流通行业的结构和管理水平已经得到很大改善。但要全面提升药品流通现代化水平，完善现代药品流通体系，还需一段时间10。随着深化医疗卫生体制改革的逐步推进，我国药品零售行必将面临新技术和新业态的挑战，而互联网诊疗和配药的迅猛发展，又将进一步冲击传统的药品零售连锁企业。药品零售连锁企业只有不断创新经营模式，加强自有品牌的建设，发挥品牌的影响力，以专业化、精细化服务来满足上游供应商和下游消费者，才能在药品零售市场的激烈竞争中立于不败之地。参考文献1 中华人民共和国商务部.商务部关于“十四五”时期促进药品流通行业高质量发展的指导意见 EB/OL.
23、(2021-10-28)2023-01-18.http:/ 中华人民共和国商务部.2021 年药品流通行业运行统计分析报告 EB/OL.(2022-09-06)2023-01-18.http:/ 国家药品监督管理局.总局关于修订印发药品经营质量管理规范现场检查指导原则有关事宜的通知 EB/OL.(2016-12-16)2023-01-18.https:/ 国家食品药品监督管理总局.关于修改药品经营质量管理规范的决定 EB/OL.(2016-07-13)2023-01-18.http:/ 肖旭坤,赵静.药品经营企业计算机管理信息系统 GSP 检查体系的建立 J.中国药业,2022,31(16):
24、31-35.6 王渊琦,彭陈万里,曹萌.药品经营电子记录应用现状与思考 J.上海医药,2021,42(17):56-59.7 赵娟.药品流通企业建立药品追溯体系的举措和交流 J.世界最新医学信息文摘,2018,18(A4):272-273.8 尚京迎,林晓明,王群,等.山东省药品零售连锁企业存在问题、整治对策及建议 J.药学研究,2022,41(6):418-420.9 石天放,崔力,王月君,等.关于提高我国药品流通行业集中度的研究以美国、日本为借鉴 J.中国食品药品监管,2022(4):43-56.10 唐民皓,沈建华,朱建云,等.药品物流高质量发展与监管政策探索 J.中国食品药品监管,2022(9):6-15.（收稿日期：2023-05-09）（上接第49页）
