1、天津药学TianjinPharmacy2023年第35卷第5期夫西地酸凝胶剂的制备及含量测定方法研究付彬，安雅婷*（天津市中医药研究院附属医院，天津300120）摘 要目的：建立夫西地酸凝胶剂的制备工艺及含量测定方法。方法：以卡波姆-940、丙二醇、聚山梨酯-80等制备夫西地酸凝胶剂，采用液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.05 mol/L磷酸-乙腈-甲醇（305020）为流动相，检测波长235 nm，柱温35，流速1 ml/min，进样量10 l，测定夫西地酸凝胶剂中夫西地酸的含量。结果：夫西地酸在12150 g/ml范围内线性关系良好（r=0.999 9），平均加样回收率为1
2、00.38%，RSD为0.86%。结论：本研究建立了夫西地酸凝胶剂的制备工艺，含量测定方法便捷可靠，为相关研究提供了有价值的参考。关键词夫西地酸；凝胶剂；制备；含量测定中图分类号：R943R927.1文献标识：A文章编号：1006-5687（2023）05-0018-04Study on the preparation process and content determination of fusidic acid gelFu Bin，An Yating*（Tianjin Academy of Traditional Chinese Medicine Affiliated Hospital，
3、Tianjin300120）ABSTRACT Objective：To establish the preparation technology and content determination method of fusidic acid gel.Methods：Fusidic acid gel was prepared with carbopol-940，propylene glycol，polysorbate 80，etc.The content of fusidic acidwas determined bythe HPLC method with octadecylsilane b
4、onded silica gel as filler and 0.05 mol/L phospho-acetonitrile-methanol（305020）as mobile phase.The detection wavelength was 235 nm，the column temperature was 35，the flow ratewas 1 ml/min，and the sample size was 10 l.Results：Fusidic acid had an excellent linear relationship in the range of 12150 g/ml
5、（r=0.999 9）.The average recovery was 100.38%，and RSD was 0.86%.Conclusions：The preparation process offusidic acid gel was established in this study，and the method of content determination was convenient and reliable，whichprovided a valuable reference for related research.KEY WORDS fusidic acid；gel；p
6、reparation；content determination收稿日期：2023鄄06鄄20基金项目：2020年天津市卫生健康科技项目（No.KJ20086）*通讯作者：安雅婷，E-mail：sherry_。夫西地酸（fusidic acid，FA）是一种从球孢镰刀菌发酵液中分离出来的，具有类甾体骨架的梭链孢烷类，抗革兰氏阳性菌的抗生素，结构与头孢菌素P1（cephalosporin P1）、烟曲霉酸（helvolic acid，HA）类似，而其特异性基团使其抗菌活性显著提高1。夫西地酸的抑菌、杀菌作用是通过抑制蛋白质合成发挥作用，在细菌蛋白质翻译过程中，梭链孢酸与细菌延伸因子G（EF-G）
7、结合，夫西地酸通过阻止EF-G从核糖体中释放，从而阻碍细菌蛋白肽链的延长，进而阻止了细菌蛋白质的合成2。在耐药性方面，夫西地酸独特的抗菌方式意味着目前尚无与其他抗菌剂类的交叉耐药性，因此与其他抗菌药物合用可减少耐药性，短期内单独使用不会产生耐药性，局部用于一般感染时，也不会增加耐药性3。同时夫西地酸还具有免疫调节抗炎作用，这种免疫调节作用与抑制细胞因子的产生有关，能抑制白细胞的趋化性，抑制单核细胞的趋化反应，抑制细胞因子分泌，因而夫西地酸不仅能直接杀灭细菌，还可以迅速消除细菌及毒素所致的组织水肿、渗出、变性、坏死等炎症反应4。夫西地酸具有脂溶性，作为局部用药，具有很强的组织渗透能力，可以穿透正
8、常、受损及无血管的皮肤。痤疮是毛囊皮脂腺慢性自限性炎症性疾病，易导致患者面部出现脓疱、丘疹、囊肿等5。外用凝胶剂具有无油腻感，易于涂展，易于洗除；既能吸收组织渗出18天津药学TianjinPharmacy2023年第35卷第5期液，又不妨碍皮肤正常功能；制剂稠度小，利于药物释放等优点，因此，考虑将夫西地酸研制成局部外用剂型；卡波姆为基质的凝胶剂具有释药快、无油腻性、易于涂展、润滑舒适、对皮肤和黏膜无刺激性等优点，特别适于治疗痤疮导致的脓疱、丘疹、囊肿等，联合本院现有广谱抗菌外用制剂，作为治疗痤疮的一种临床备选制剂联合应用方案。本研究建立了夫西地酸凝胶剂的制备方法和含量测定方法，以便有效控制制剂
9、质量。1仪器与试药1.1仪器电子分析天平（型号：AG135型，厂家：METTLER-TOLEDO）；pH计（型号：DELTA320型，厂家：METTLER-TOLEDO）；加热磁力搅拌器（型号：SH-3型，厂家：天津市泰斯特仪器有限公司）；高效液相色谱仪（型号：LC-20AD型，厂家：日本岛津制造所）。1.2试药卡波姆-940（广州康乔汉普药业有限公司，批号20191202）；氢氧化钠（成都华邑药用辅料制造有限责任公司，批号F20190001542）；丙二醇（湖南尔康制药股份有限公司，批号100420200401）；乙醇（梅 河 口 市 阜 康 酒 精 有 限 责 任 公 司，批 号10042
10、0200401）；二甲基亚砜（本溪市轻化工研究所实验厂，批号20190507）；聚山梨酯-80（南京威尔药业集团股份有限公司，批号20180501）；夫西地酸标准品（北京曼哈格生物科技有限公司，批号E0025787）；磷酸（天津市大茂化学试剂厂，色谱纯）；乙腈（美国飞世尔科学世界公司，色谱纯）；甲醇（美国飞世尔科学世界公司，色谱纯）；夫西地酸凝胶剂（天津市中医药研究院附属医院制剂室，含量为2%，批号为20210412，20210413，20210414）。2方法与结果2.1配制工艺取夫西地酸20 g，加适量二甲亚砜搅拌溶解；加入已分散均匀的卡波姆混合液中（卡波姆-940 8 g用丙二醇和乙醇分
11、散），缓慢加入聚山梨酯-80 5 g，适量的水和10%氢氧化钠，最后缓慢加入剩余量的水，搅匀，制成1 000 g，即得。本品为白色至微黄色半透明稠厚液体。凝胶剂pH值为5.07.0。2.2色谱条件照高效液相色谱法 中国药典2020年版四部通则0512）测定。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Agilent Eclipse Plus C18）；以0.05 mol/L磷酸-乙腈-甲醇（305020）为流动相；检测波长235 nm，柱温35，流速1 ml/min，进样量10 l，理论板数按夫西地酸峰计算不低于2 000。2.3溶液的制备2.3.1对照品溶液的制备取夫西地酸对照品，加流动相溶解并稀释制成
12、每1 ml中约含60 g的溶液。2.3.2供试品溶液的制备取本品0.5 g，精密称定，置50 ml量瓶中，加入流动相适量超声使溶解，放冷至室温，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液3 ml置10 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。2.3.3阴性样品溶液的制备取除夫西地酸外的其他原料，按“2.1”项下方法制备夫西地酸凝胶剂阴性样品，并按“2.3.2”项下方法制备成阴性样品溶液。2.4系统适用性试验精密量取对照品、供试品和阴性样品溶液各10 l，按“2.2”项下色谱条件进行测定，对照品的理论塔板数不低于2 000，在此色谱条件下，夫西地酸色谱峰与相邻色谱峰之间的分离度
13、大于1.5，对称因子在0.951.05之间，夫西地酸与其他成分可以有效地进行分离，阴性样品对测定无干扰。色谱图见图1。05101520t/minA05101520t/minB05101520t/minC1.夫西地酸图1对照品（A）阴性样品（B）供试品（C）HPLC色谱图1119天津药学TianjinPharmacy2023年第35卷第5期编号称样量（g）样品含量（mg）加入量（mg）10.250 85.1105.08020.251 35.1205.08030.249 65.0865.08040.248 25.0575.08050.251 75.1295.08060.249 25.0785.08
14、0测得量（mg）10.2010.2710.1210.1010.4110.17回收率（%）100.10100.6999.5599.83101.97100.12表23批样品含量测定结果（n=3）表1夫西地酸回收率试验结果（n=6）2.5线性关系考查精密称取干燥至恒重的夫西地酸对照品60 mg，加流动相溶解并稀释至100 ml，得到600 g/ml溶液，为标准品母液。分别精密吸取标准品母液2、5、10、15、20和25 ml，加流动相稀释至100 ml，制成含夫西地酸分别为12、30、60、90、120和150 g/ml的梯度浓度溶液，按“2.2”项下色谱条件测定峰面积，以夫西地酸浓度（X，g/ml
15、）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标绘制标准曲线。回归方程：Y=9555.6343X-4 904.343 3（r=0.999 9）。结果表明夫西地酸在12150 g/ml范围内线性良好。2.6精密度试验取同一份供试品（批号20210413）溶液，按“2.2”项下色谱条件重复进样6次，结果供试品溶液中夫西地酸峰面积值的RSD为0.25%，表明进样精密度试验符合要求。2.7稳定性试验取同一份供试品（批号20210413）溶液，按“2.2”项下色谱条件分别于0、2、4、6、8、10、12和24 h进样，结果夫西地酸峰面积的RSD为0.70%，表明供试品溶液在24 h内测定稳定。2.8重复性试验取同一批次
16、样品（批号20210413）6份，按“2.3.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.2”项下色谱条件分别进样，求得峰面积，计算RSD为1.25%，符合要求。2.9加样回收率试验精密称取已知夫西地酸含量的夫西地酸凝胶剂样品（批号20210413），并精密添加一定量夫西地酸对照品，按“2.3.2”项下方法制备溶液，按“2.2”项下色谱条件样品测定，求得峰面积，计算回收率。结果平均加样回收率为100.38%，RSD为0.86%，见表1。2.10样品测定取3个 不 同 批 号 的 样 品，按“2.3.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.2”项下色谱条件分别进样，求得峰面积，计算夫西地酸含量，结果见表2。
17、3讨论3.1试药及剂型选择夫西地酸是一种窄谱、高效抗革兰阳性菌的抗生素，在临床使用中，对治疗皮肤感染具有极好的效果，长期使用仍对绝大多数葡萄球菌保持较强的抗菌活性，且与其他抗生素不易产生交叉耐药性。临床上夫西地酸用于治疗革兰阳性菌感染，有局部外用、口服和静脉途径三种给药方式，局部夫西地酸的主要临床适应症是治疗浅表皮肤感染尤其是对金黄色葡萄球菌、痤疮丙酸杆菌引起的皮肤感染的抗菌活性强，不良反应少，安全且高效，目前外用夫西地酸剂型，包括软膏、乳膏和洗剂，已经在欧洲、加拿大和一些亚洲国家临床应用了数十年6。凝胶剂是稠厚液体或半固体制剂的制剂，由药物与特定的辅料以一定的比例构成，通常有均一、混悬或乳状
18、液几种形态。在凝胶剂中，活性成分能够以缓释、控释的方式得到有效释放，且具有稳定的性质，用药时易于涂布，用药后易吸收、不污染衣物等诸多优点。考虑到主要适应症毛囊炎、脓疱疮、痤疮等多有创口及分泌物，制成水凝胶，而凝胶基质与黏膜分泌液接触后膨胀，相较软膏剂，其可局部定位而延长药物滞留时间，同时可减少药物对黏膜的刺激性。由于夫西地酸为有机弱酸，水溶性小，制剂难度较大，且受限于本院制剂室生产工艺和生产设备，将其制成乳膏剂或微乳凝胶剂等剂型并不现实，因此本研究试将夫西地酸在本院现有制剂工艺和生产条件下制成普通水凝胶剂，既可局部定位延长药物滞留时间，同时可减少药物对皮肤的刺激性，更利于发挥夫西地酸的治疗批号
19、202104122021041320210414含量（%）2.037 61.968 81.975 020天津药学TianjinPharmacy2023年第35卷第5期作用。3.2制剂工艺及样品工艺稳定性卡波姆-940是一类丙烯酸与丙烯基蔗糖交联的聚丙烯酸树脂高分子聚合物，多用于凝胶剂、乳膏剂等剂型，具有高黏度、增黏效果好、与皮肤黏膜的耦合效果好、质地均匀、无油腻感、释药快等特点；同时，卡波姆与皮肤具有一定的亲和力，在制剂中能减少刺激性物质对皮肤的刺激和伤害，因此选择卡波姆-940为凝胶剂的主要辅料7。在处方中加入10%的氢氧化钠，既可增加卡波姆-940胶体的黏稠度，又能调节凝胶剂的pH值，延长
20、凝胶剂的稳定性；由于夫西地酸在水中溶解性差，因此将其溶解于二甲基亚砜中，增强其溶解，再缓慢加入由乙醇和丙二醇溶胀后的卡波姆凝胶中，从而更有利于夫西地酸在卡波姆-940胶体混合形成均匀的混悬剂。依据2020年版 中国药典 四部9001原料药物与制剂稳定性试验指导原则项下要求，应在处方筛选与工艺设计过程中，根据主药与辅料性质，进行影响因素试验设计，同时结合0114凝胶剂项下要求，凝胶剂在生产与贮藏期间应符合以下规定，如分散均匀，不应下沉、结块，均匀、细腻，在常温时保持胶状，不干涸或液化等8。因此，分别于0、1、3和6个月，取3批凝胶样品，分别采用离心（转速3 000 r/min离心30 min）、
21、低温 （53）、热恒温 （302）试验对样品工艺稳定性进行考查9，观察凝胶剂外观变化，试验结果表明凝胶剂分散均匀、细腻，工艺稳定，未见下沉、结块，分层及其他外观变化现象。3.3测定方法本研究采用HPLC方法建立夫西地酸的含量测定方法，经过优化不同色谱柱型号，如Eclipse Plus C18、ZORBAX SB-C18、ZORBAX NH2、ZORBAX SB-Phenyl、BDS HYPERSIL C18、ZORBAXBonus-RP C18、Shim-pack GIST C18；不同流动相体系，如乙腈-水、甲醇-水、乙腈-磷酸、甲醇-磷酸、乙腈-甲醇-磷酸；不同柱温，如30、35和40；不
22、同流速，如1和2 ml/min；不同检测波长，如PDA检测器扫描190700 nm等色谱条件，结果显示前文所述条件为最佳色谱条件，可以满足夫西地酸凝胶剂的含量测定的分离检测要求。3.4提取方法提取方法筛选方面，由于夫西地酸在水中较难溶出，本研究考查了夫西地酸凝胶剂分别在不同浓度的甲醇及乙腈中进行超声或加热回流提取，在一定时间内肉眼观察无凝胶剂残留，即视为其溶解完全，最终选择加入适量的流动相进行超声提取。选用水性凝胶基质制备夫西地酸外用凝胶剂，可提高患者用药安全性，延长药物作用时间，方便患者使用，从而提高患者的用药依从性，有利于更好地发挥夫西地酸的治疗作用。配合本院已有广谱抗菌制剂，将发挥其更好
23、的临床疗效，为广大患者带去福音。本试验以本院现有制剂工艺为基础研制夫西地酸凝胶剂，制备工艺简单，含量测定方法可靠便捷。参考文献1肖瑶.夫西地酸联合多西环素对金黄色葡萄球菌的抗菌作用及防耐药突变选择窗的影响 D.宜春：宜春学院，2022：34-35.2祁丽萍，李子安，何建平.注射夫西地酸钠致不良反应原因分析及护理体会 J.护士进修杂志，2014，（11）：1049-1050.3陈卫东，刘雪芳.夫西地酸钠的药理研究及临床应用进展 J.中国当代医药，2012，19（34）：24-25.4Maviglia R，Nestorini R，Pennisi M.Role of old antibiotics
24、in multidrugresistant bacterial infectionsJ.Curr Drug Targets，2009，10（9）：895-905.5陈婷婷，赖应庭，张林香，等.LED红蓝光照射联合异维A酸胶囊、夫西地酸乳膏治疗面部寻常型痤疮的疗效评价 J.中国医疗美容，2020，10（1）：28-31.6李羞月.中药汤剂内服联合夫西地酸乳膏外敷治疗寻常痤疮的临床效果 J.临床合理用药杂志，2022，15（1）：131-134.7庄远红，林娇芬，潘裕添.羧化壳聚糖卡波姆复合凝胶的制备及抑菌性研究 J.福建农林大学学报（自然科学版），2015，44（4）：408-413.8中国药典 S.四部.2020：18.9董康.消肿凝胶剂制备工艺质量标准的验证 J.山西职工医学院学报，2018，28（6）：1-3.21
