1、生物梅里埃厌氧菌生物梅里埃厌氧菌 处理方案处理方案 第1页定义定义是指一大群在有氧条件下不能生长，必须在无氧条件是指一大群在有氧条件下不能生长，必须在无氧条件下才能生长细菌。这类细菌缺乏完整代谢酶系统，其下才能生长细菌。这类细菌缺乏完整代谢酶系统，其能量代谢以无氧发酵形式进行，不但不能利用氧气，能量代谢以无氧发酵形式进行，不但不能利用氧气，反而被其抑制。反而被其抑制。第2页常见厌氧菌分类常见厌氧菌分类菌类菌类属属常见种常见种革兰阳性球菌革兰阳性球菌厌氧球菌属厌氧球菌属厌气葡萄球菌、厌气链球菌厌气葡萄球菌、厌气链球菌消化球菌、消化链球菌消化球菌、消化链球菌革兰阴性球菌革兰阴性球菌厌氧球菌属厌氧球
2、菌属小韦荣球菌小韦荣球菌大韦荣球菌大韦荣球菌革兰革兰阴性杆菌阴性杆菌类杆菌属类杆菌属脆弱类杆菌脆弱类杆菌、产黑色素类杆菌、产黑色素类杆菌梭形杆菌属梭形杆菌属二路类杆菌、二路类杆菌、普通类杆菌普通类杆菌、普雷沃杆菌属普雷沃杆菌属核梭杆菌、坏死梭杆菌、核梭杆菌、坏死梭杆菌、卟啉单胞菌属卟啉单胞菌属死亡梭杆菌、解糖普雷沃杆菌死亡梭杆菌、解糖普雷沃杆菌无芽胞革兰阳性杆菌无芽胞革兰阳性杆菌放线菌属放线菌属伊氏、纳氏放线菌、伊氏、纳氏放线菌、真杆菌属真杆菌属不介糖真杆菌、迟缓真杆菌、不介糖真杆菌、迟缓真杆菌、丙酸杆菌属丙酸杆菌属痤疮颗粒丙酸杆菌、痤疮颗粒丙酸杆菌、双歧杆菌属双歧杆菌属短双歧杆菌、长双歧杆菌
3、、短双歧杆菌、长双歧杆菌、乳酸杆菌属乳酸杆菌属嗜酸乳酸杆菌嗜酸乳酸杆菌产芽胞革兰阳性杆菌产芽胞革兰阳性杆菌梭菌属梭菌属产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌、难辩梭菌、难辩梭菌、破伤风梭菌破伤风梭菌第3页厌氧菌分离判定流程氧菌分离判定流程样本本 血血琼脂脂 厌氧血氧血琼脂或脂或 涂片革涂片革兰染色染色 中国中国蓝琼脂脂 选择培养基培养基 统计结果果 需氧培养基需氧培养基18-24h 48h 厌氧培养氧培养 需氧菌判定需氧菌判定汇报 可疑菌菌落做耐氧可疑菌菌落做耐氧试验 需氧需氧24h 厌氧氧48h 生生长 不生不生长 生生长 不生不生长 兼性兼性厌氧菌或需氧菌氧菌或需氧菌 作第二次耐氧作第二次耐氧试验 兼性
4、或需氧菌兼性或需氧菌 厌氧氧(+)需氧需氧(-)涂片并与最初涂片涂片并与最初涂片 VITEK API 20A 气相色气相色谱 PCR 菌种保留菌种保留 药敏敏试验:对照有没有照有没有遗漏漏 ANI卡卡 Rapid ID 32A Etest 或或 琼脂脂稀稀释法法第4页几个主要厌氧菌特征几个主要厌氧菌特征细菌细菌血琼脂菌落形态血琼脂菌落形态镜下形态镜下形态其它特征其它特征脆弱类杆菌脆弱类杆菌突起、灰白色、透明突起、灰白色、透明G-G-杆菌、多形态、杆菌、多形态、耐卡那霉素、青耐卡那霉素、青折光微溶血折光微溶血染色不匀染色不匀霉素、胆汁促生长霉素、胆汁促生长触酶阳性触酶阳性产黑色素类杆菌产黑色素类
5、杆菌突起、桃红色荧光、突起、桃红色荧光、小、末端园型、小、末端园型、卡那：卡那：R R白光下棕黑色、溶血白光下棕黑色、溶血常呈球型常呈球型青霉素：青霉素：S S胆汁抑制生长胆汁抑制生长核梭杆菌核梭杆菌突起闪光、斑点状、面包突起闪光、斑点状、面包长梭状、二头长梭状、二头卡那、青霉素卡那、青霉素“S S”屑样斑点菌落、绿色溶血屑样斑点菌落、绿色溶血尖细、有时呈尖细、有时呈可被胆汁抑制、可被胆汁抑制、纤维状纤维状ind+ind+、脂酶阴性脂酶阴性消化球菌消化球菌小突起、灰白浑浊、边缘小突起、灰白浑浊、边缘大小不等、可成单、大小不等、可成单、巨消化球菌、形态大巨消化球菌、形态大透明、可溶血或绿色溶血透
6、明、可溶血或绿色溶血成双、成堆成双、成堆成堆、液化明胶。成堆、液化明胶。不介糖消化球菌不介糖消化球菌ind+ind+消化链球菌消化链球菌同上同上大小不等成对成链大小不等成对成链形态较小形态较小产气荚膜杆菌产气荚膜杆菌微突起、微浑浊、灰色、边缘微突起、微浑浊、灰色、边缘大、末端钝大、末端钝无动力、液化明胶、发无动力、液化明胶、发整齐或不规则。宽双溶血环整齐或不规则。宽双溶血环芽胞极难形成芽胞极难形成酵各种糖、水解七叶苷酵各种糖、水解七叶苷第5页厌氧培养方法厌氧培养方法一、简易厌氧袋培养法一、简易厌氧袋培养法 方便方便 易使用易使用原理:用一个透明、不透气塑料袋作为厌氧容器，内置化学吸氧装置（如连
7、二亚硫酸钠和碳酸氢钠，或产H2,CO2化课时间和催化剂钯粒，或商品化产气条），厌氧指示剂二、厌氧罐二、厌氧罐(盒盒)培养法培养法 方便方便 易使用易使用三、厌氧手套箱法三、厌氧手套箱法 当今国际公认培养厌氧菌最正确方法，但价格昂贵，而且长久维持手套保持厌氧环境需要消耗大量混合气体，费用很高，限制了其推广应用四、四、Oxyrase酶平皿培养系统酶平皿培养系统五、气体喷射培养法五、气体喷射培养法六、其它方法六、其它方法（一）液体培养法（二）高层琼脂培养法第6页生物梅里埃厌氧培养系统生物梅里埃厌氧培养系统简易厌氧袋（盒）培养简易厌氧袋（盒）培养第7页特殊气体发生剂特殊气体发生剂全部产气装置包含全部产
8、气装置包含全部产气装置包含全部产气装置包含:活性碳抗坏血酸钠有机和无机成份最终气体环境与以上各化学成份量多少相关最终气体环境与以上各化学成份量多少相关F不需水不需水 F不需催化剂不需催化剂 F 不产热不产热第8页特殊气体发生剂特殊气体发生剂高性能：能在1小时内到达所需要气体环境第9页厌氧指示剂厌氧指示剂亚甲兰亚甲兰 +还原剂还原剂在无氧环境无色在无氧环境无色有氧环境为兰色有氧环境为兰色方法方法 :在反应区加在反应区加1 1滴水滴水并放进厌氧缸或厌氧袋内并放进厌氧缸或厌氧袋内 4-64-6小时后变成无色小时后变成无色每次用新指示条货号:96118规格:50条第10页GENbag需培养平板数量少时
9、需培养平板数量少时GENboxGENbox已经关闭时已经关闭时急诊标本急诊标本小型试验室小型试验室APIAPI试剂条试剂条适合于单个使用适合于单个使用 GENbag anaer:GENbag anaer:最多放最多放5 5个平板个平板+1+1个厌氧指示剂个厌氧指示剂 GENbag CO2:GENbag CO2:最多放最多放2 2个平板个平板 GENbag microaer:GENbag microaer:最多放最多放2 2个平板个平板 1 1个个GENbagGENbag和产气袋可供和产气袋可供1 1个个API API 试剂条或试剂条或2 2个个ATBATB试剂条培养用试剂条培养用.第11页GE
10、Nbag名称名称名称名称GENbagGENbagGENbagGENbagGENbagGENbagGENbagGENbagGENbagGENbagGENbagGENbagAnaerAnaerAnaerAnaerCOCOCOCO2 2 2 2MicroaerMicroaerMicroaerMicroaer货号货号货号货号45 53445 53445 53345 53345 53245 532试验数试验数试验数试验数202020202020包装包装包装包装2020个袋个袋2020个袋个袋2020个袋个袋2020个产气包个产气包 20 20个产气包个产气包 20 20个产气包个产气包 保留保留保留保留
11、 2-25 C2-25 C干燥环境干燥环境2个密封夹最多可重复用个密封夹最多可重复用10次次GENbag GENbag GENbag GENbag 密封夹密封夹密封夹密封夹货号货号.45 511.45 511含含1010个密封夹个密封夹第12页GENbox体积大，可放置平板多经惯用于特殊气体环境适合天天使用产气袋使用数量需依据GENbox容积确定 2.5L GENbox可放12个平板+1个产气袋 7L GENbox可放42个平板+3个产气袋 使用使用APIAPI厌氧判定条，先在试条盘中加水，再把厌氧判定条，先在试条盘中加水，再把APIAPI试条放进盘，然后放入缸内试条放进盘，然后放入缸内,放厌
12、氧指示剂放厌氧指示剂.第13页名称名称GENboxGENboxGENboxGENboxGENboxGENboxanaeranaerCOCO2 2microaermicroaer货号货号96 12496 12696 125包装包装10个产气袋 10个产气袋 10个产气袋保留保留 2 25 干燥环境GENbox第14页GENbox Jars货号货号96 12796 128缸容量缸容量2.5 L7 LGENbox聚碳酸酯缸硅酮盖密封第15页GENbag/GENbox使用方法：1.把平板放进培养袋/缸内2.从铝箔袋内取出产气条3.放进塑料培养袋/缸内4.立刻用密封夹密封培养袋/盖严培养缸第16页不要往
13、产气包内加水:灭活反应培养过程中不能打开产气袋/缸假如厌氧袋/缸打开并需进行再培养:用一个新产气包因为Genbox/bag气体容积经过校正，所以必须使用同系统产气包应快速将产气袋放入Genbox/bag.不要迟疑!时间不能超出时间不能超出 :GENbag-30秒；GENbox-1分钟 GENbag/box anaer:确认厌氧指示条颜色改变 Genbag CO2-microaer:假如只有1个平板培养,需再放1个空平板GENbag/GENbox注意注意第17页产品种类齐全产品种类齐全可培养厌氧菌、微需氧菌、嗜二氧化碳菌可培养厌氧菌、微需氧菌、嗜二氧化碳菌高性能高性能快速产生最正确培养环境快速产
14、生最正确培养环境简单简单不需要缸不需要缸,水水,触酶和不产热触酶和不产热培养盒种类齐全，长方形设计，节约空间培养盒种类齐全，长方形设计，节约空间操作过程简单操作过程简单实用实用可经过透明容器观察是否有菌落生长，不需要打开容器可经过透明容器观察是否有菌落生长，不需要打开容器标准组件系统标准组件系统 :相同系统可用于平板相同系统可用于平板,API,API试剂条试剂条,.,.GENbag/GENbox第18页厌氧培养用培养基厌氧培养用培养基斯氏琼脂斯氏琼脂+5%+5%羊血：适用全部厌氧菌生长羊血：适用全部厌氧菌生长 货号：货号：43401 2090mm 43279 100*90mm43401 209
15、0mm 43279 100*90mm斯氏万古霉素斯氏万古霉素+5%+5%羊血：适用革兰阴性厌氧菌分离（主羊血：适用革兰阴性厌氧菌分离（主要为类拟杆菌和普雷沃菌属）要为类拟杆菌和普雷沃菌属）货号：货号：43223 1090mm43223 1090mm产气荚膜梭菌选择培养基产气荚膜梭菌选择培养基 货号：货号：43603 6200ml43603 6200ml亚硫酸铁琼脂亚硫酸铁琼脂 计数食品中亚硫酸盐还原厌氧菌和产气荚膜梭菌计数食品中亚硫酸盐还原厌氧菌和产气荚膜梭菌 货号：货号：51048 TSN51048 TSN琼脂琼脂 500g 500g 分离产气荚膜梭菌分离产气荚膜梭菌第19页惯用厌氧菌判定方
16、法惯用厌氧菌判定方法常常规生化判定法生化判定法1、手工生化判定方法2、生化判定条判定法预成成酶判定法判定法 厌氧菌菌体内含有各种酶，在菌体暴露空气死亡后仍能较长时间地保留其活性。利用这一特征，采取特定底物和指示剂，测定代检厌氧菌预成酶种类和活性，从而判定出厌氧菌种属第20页生物梅里埃判定产品生物梅里埃判定产品手工手工 半自动半自动 全自动全自动ANC卡片货号：21347Rapid ID 32 A货号：32300API 20 A货号：20300第21页API 20 A操作流程操作流程第22页自动细菌判定-ATB第23页 比浊器(Densimat):提供提供标准、标准、简单及准确简单及准确细菌浓度细菌浓度。连续加样器(Electronic Pipette):提提供标准化、简单及准确加样供标准化、简单及准确加样量量。标准化接种方法标准化接种方法第24页1.1.1.1.取菌取菌取菌取菌2.2.2.2.稀释稀释稀释稀释3.3.3.3.加样加样加样加样ATB ATB 耗材操作规程耗材操作规程4.4.4.4.孵育孵育孵育孵育5.5.5.5.加附加试剂加附加试剂加附加试剂加附加试剂6.6.6.6.读取结果读取结果读取结果读取结果第25页VITEK:VITEK:全自动细菌判定仪全自动细菌判定仪第26页=树立自动化操作金标准树立自动化操作金标准传统与现代的完美结合第27页WWW.bioM第28页
