1、高二年级生物 专题二专题二 微生物的培养与应用微生物的培养与应用 1.何为培养基？ 3.不同的培养基有不同的配方，但是 其基本成分都相同，都包括哪些营养 成分？有何作用？请举例说明。 自主学习: 2.按照不同的培养基划分标准，培养 基有哪些种类、配制特点及其应用？ 一、培养基一、培养基 一、培养基一、培养基 鉴别培养基 选择培养基 人们按照微生物对营养物质的不同需求 ，配制出供其生长繁殖的营养基质。 固体培养基 液体培养基 天然培养基 合成培养基 一、培养基一、培养基 选择培养基选择培养基 鉴别培养基鉴别培养基 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生在微生物学中，将允许特定种类的微生物生 长，
2、同时抑制或阻止其它种类微生物生长的长，同时抑制或阻止其它种类微生物生长的 培养基。培养基。 根据微生物的代谢特点根据微生物的代谢特点 在培养基加入某种在培养基加入某种 指示剂或化学药品配制而成，用以鉴别不同指示剂或化学药品配制而成，用以鉴别不同 的微生物。的微生物。 选择培养基应用 加入青霉素分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐分离金黄色葡萄球菌 不加氮源分离固氮菌 不加含碳有机物的 无碳培养基 分离自养型微生物 加入青霉素等抗生 素 分离导入了目的基因的受 体细胞 牛肉膏蛋白胨固体培养基配方牛肉膏蛋白胨固体培养基配方 牛肉膏牛肉膏 5.0g5.0g 蛋白胨蛋白胨 10.0g10.0g Na
3、ClNaCl 5.0g 5.0g 琼脂琼脂 20.0g20.0g 将上述物质溶解后，用蒸馏水将上述物质溶解后，用蒸馏水 定容至定容至1000ml1000ml。 一、培养基一、培养基 根据配方你能配制出根据配方你能配制出100ml100ml培养基吗？培养基吗？ 配方中的各成分为微生物提供了哪些营养？配方中的各成分为微生物提供了哪些营养？ 固体培养基：菌落 菌落 菌 落 是 鉴 定 菌 种 的 重 要 依 据 1、何为无菌技术？无菌技术包括哪 些方面？ 2、消毒和灭菌的区别？ 3、常用的消毒方法有哪些？ 4、常用的灭菌方法有哪些？ 5、干热灭菌法和高压蒸汽灭菌法的 操作步骤。 二、无菌技术二、无菌
4、技术 自主学习： 消毒 使用较温和的物理或化学方法仅杀死物 体表面或内部一部分对人体有害的微生 物（不包括芽孢和孢子）。 灭菌 使用强烈的理化因素杀死物体内所有的 微生物，包括芽孢和孢子。 二、无菌技术二、无菌技术 常用的消毒方法 1、100煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 下煮30min或 80 下煮15min 3、用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒 4、氯气消毒水源 5、紫外线消毒 二、无菌技术二、无菌技术 1、灼烧灭菌 2、干热灭菌：160-170 下加热1-2h。 3、高压蒸气灭菌： 100kPa、121 下维持 15-30min。 常用的灭菌方法 二、无菌技术二、无菌技
5、术 A.培养细菌用的培养基或培养皿 B.玻棒、试管、烧瓶和吸管 C.接种环、接种针 D.实验操作者的双手 灭菌 灭菌 灭菌 消毒 二、无菌技术二、无菌技术 三、基本操作程序三、基本操作程序 1、器具的灭菌 2、培养基的配制 3、培养基的灭菌 4、倒平板 5、微生物接种 6、恒温箱中培养 7、菌种的保存 1 1、倒平板技术、倒平板技术 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 左 右时，才能用来倒平板。你用什么办法 来估计培养基的温度？ 可以用手触摸盛有培养基的锥形 瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫 手时，就可以进行倒平板了。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微 生物污
6、染培养基。 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养 基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板 还能用来培养微生物吗？为什么？ 平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培 养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可 以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防 止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养 基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生 物。 2 2、微生物的接种技术、微生物的接种技术 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都 要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼 烧接种环吗？为什么？ 操作的第一步灼烧接种环是为了避免
7、接种 环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线 前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接 种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环 上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通 过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目 逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接 种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免 细菌污染环境和感染操作者。 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷 却后再进行划线？ 以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时 ，为什么总是从上一次划线的末端开始划 线？ 划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处 要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细 菌的数目随着划线次数的
8、增加而逐步减少，最 终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 涂布平板的所有操作都应在火焰附 近进行。结合平板划线与系列稀释的无 菌操作要求，想一想，第2步应如何进行 无菌操作？ 应从操作的各个细节保证“无菌”。 例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸 管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒 精灯火焰周围等等。 3 3、微生物的恒温培养、微生物的恒温培养 3 3、微生物的恒温培养、微生物的恒温培养 1、临时保藏： 接种到固体斜面培 养基，菌落长成后 置于4冰箱保存。 2、长期保存： 甘油冷冻管藏法 4 4、菌种的保存、菌种的保存 四、课题成果评价 （一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中
9、保温12 d后 无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要 重新制备。 （二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基 本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操 作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则 说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析 原因，再次练习。 （三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养12 h与24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有 明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能 观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培 养学生良好的科学态度与习惯。 实践实践: :分离土壤中的细菌分离土壤中的细菌 1、由土壤浸出液中提取细菌。 2、有哪些注意事项？ 3、如何判断土壤中有哪些种类的细 菌？菌落的特征？
