1、血糖的测定血糖的测定 实验四实验四 1 血糖及血糖水平的概念：血糖及血糖水平的概念： 血糖：指血液中的单糖：葡萄糖 血糖水平：血浆中葡萄糖浓度 血糖总维持在恒定水平： 3.96.7mmol/L 2 v调节血糖水平的激素：胰岛素、胰高血糖素、糖皮质 激素和肾上腺素。 v血糖水平异常：高血糖及糖尿病；低血糖 3 临床：血糖检测是目前诊断糖代谢异常相关疾 病的主要依据。 科研：在代谢疾病的研究中，常测定血糖。在 某些药物的研究中，也涉及血糖的测定。 测定血糖的意义测定血糖的意义 4 测定 方法 无机化学法： Folin-Wu法 有机化学法：邻甲苯胺法 酶法：葡萄糖氧化酶法 血糖测定的常用方法血糖测定
2、的常用方法 5 葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法原理 （1）葡萄糖O2H2O （2）H2O24-氨基安替吡啉苯酚 葡萄糖酸H2O2 葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶 （GODGOD） H2O 红色醌式物质 过氧化物酶过氧化物酶 （PODPOD） TrinderTrinder反应反应 505nm 光吸收法测定光吸收法测定相对血糖浓度相对血糖浓度 6 分光光度计的工作原理 7 朗伯-比尔定律 朗伯定律：A=k1L 比尔定律：A=k2C 朗伯-比尔定律：如同时考虑液 层厚度和溶液浓度对吸光度的 影响，则吸光度与溶质的浓度 和溶液的厚度的乘积成正比。 A=KLC 8 朗伯-比尔定律应用 A标=KC标L A样=KC样
3、L 标准品法测定未知样品含量 C样= A样 A标 C标 9 1. 接通电源，调整波长。 2. 比色杯中加入空白及待测样品，并放入分光光度计中 ，注意：加入样品量不超过比色杯体积的2/3。 3. 调模式为“透射比”，对空白对照进行调“0”（开盖） 和调“100”（闭盖）。 4. 调模式为“吸光度”，将空白对照调“0”，测定待测样 品的吸光度值。 分光光度计的使用分光光度计的使用 10 11 12 葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶- -过氧化物酶法检测激过氧化物酶法检测激 素对血糖浓度的影响素对血糖浓度的影响 方法方法 13 （1）取4支试管，按下表加入试剂: 试剂标准管 (ml) 测定管 1(ml) 测
4、定管 2(ml) 空白管 (ml) 血清样品0.020.02 葡萄糖标准液0.02 蒸馏水0.02 酶酚混合试剂3.003.003.003.00 实验步骤：实验步骤： 充分混匀，37 水浴中保温20min； 冷却至室温后，505nm处比色 比色方法：以空白管调零，读取标准管及测定管光密度值。14 （2）计算： 依据朗伯-比尔定律： A=KLC 标准管葡萄糖浓度：5mmol/L 测定管葡萄糖含量（ mmol/L） 测定管光密度 标准管光密度 5 15 正确使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比色液 应占比色皿的2/3。 血糖测定应在取血后2小时内完成，放置太久，血 糖易分解，故使含量降低。 酶酚混合液一般现用现配。 注意事项注意事项 16 小结小结 1、葡萄糖氧化酶-过氧化物酶比色法 测定血糖的原理。 2、分光光度计的正确使用。 3、实验操作中存在的问题。 17
