1、钮按到“ON”标志处，关闭紫外灯，开启实验照明灯。7.3将“Blower”按钮按到“ON”位置，打开鼓风机，然后把生物安全柜前玻璃窗拉升到适当位置（不能高于25.4cm,否则仪器会报警），待鼓风机运转15min后，将双臂缓缓伸入安全柜内，静止1min,待压力指示仪表稳定以后，再进行实验操作。7.4操作时应按照从清洁区到污染区进行，以避免交叉污染。为防止可能溅出的液滴，可在操作台面上铺一层用消毒剂浸泡过的纱布，但不能覆盖生物安全柜气流通道。7.5实验完成后，先用消毒液溶液擦拭操作台面，然后关闭玻璃窗，保持风机继续运转1015min，同时打开紫外线灯，消毒30min。7.6消毒30min后，关闭紫
2、外灯和鼓风机。8注意事项8.1生物安全柜内不得放入与本次实验无关的物品，物品放置不得挡住气道口，以免干扰气流正常流动。8.2操作时，严禁使用酒精灯等明火，以避免产生的热量干扰柜内气流稳定，且明火可能损坏高效过滤器。8.3操作时，尽量减少实验室内人员走动，以防止柜内气流不稳定。8.4在实验操作时，操作者应保证脸部在工作窗口之上，动作应轻柔、舒缓，防止柜内气流受到影响。8.5生物安全柜应定期进行检测与保养。工作中一旦发现生物安全柜运行异常，应立即停止使用，采取相应处理措施，并通知相关人员检查维修。9相关文件及表单（略）人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（化学发光法）临床检验标准操作规程一、项目名称：人
3、类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（化学发光法）二、实验原理：采用双抗原夹心（两步法）分析模式，预先采用基因工程HIV(1+2) 特异性蛋白抗原包被固相发光微孔板。加入血清或血浆标本后，待测抗体与包被抗原形成复合物，再加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的相同抗原，三者结合形成双抗原夹心结构，洗涤除去未结合的酶标抗原，加入HRP化学发光底物液，测定其发光强度（RLU），根据临界值判断样本中是否含有HIV特异性抗体。三、试剂：为北京科美生物技术有限公司提供人类免疫缺陷病毒抗体化学发光诊断试剂盒，规格为96T，2-8贮存，有效期6个月；在效期内使用试剂。四、 仪器：可适用北京科美生物技术有限公司提供的Glo
4、Run、CDM-I发光分析仪、ECLIA-II发光分析仪、CHEMCLIN-600全自动发光仪、CHEMCLIN-1500全自动发光仪。五、操作步骤： 5.1自4冰箱中取出试剂盒，室温(1825)平衡20分钟。5.2将发光板从密封袋中取出，设空白对照一孔，不加样本稀释液和样本，设阴性对照3孔，阳性对照2孔，取阴性对照和阳性对照分别加入100l 于相对应对照孔中。其余每孔先加样本稀释液50l，再加入样本50l。微量震荡器充分振荡混匀，用不干胶片封盖反应板。 5.3发光板置37温育30分钟，小心甩去反应液，用稀释后的洗涤液洗板5次，每孔加满洗涤液，每次浸泡10秒，最后在干净的吸水纸上拍干。5.4空
5、白孔除外，每孔加入酶结合物100l，轻轻振荡混匀后，用不干胶片封盖反应板。5.5发光板置37温育30分钟，洗板5次，操作同上，拍干。5.6将发光底物A液与B液 1:1混合后，每孔加入底物工作液100l。5.7置室温避光反应5分钟后，须于加化学发光底物液后的第5-30分钟内用发光仪测定各孔RLU值（测量时间1秒/孔）。六、质量控制： 6.1 质控血清符合规定；6.2 一旦发现失控，应即时查找和分析原因，并在该结果栏作详细的批注和记录解决的过程；失控情况处理及原因分析按照实验室内失控分析程序进行。七、结果计算7.1临界值（CUTOFF） 2.1阴性对照孔平均RLU值。7.2待测样品RLU值 临界值
6、为HIV抗体阳性。7.3待测样品RLU值 临界值为HIV抗体阴性。对呈阴性反应的样品，可由实施检测的实验室出具HIV抗体阴性报告；对呈阳性反应的样品，须进行复检，不能出阳性报告。阳性样品的复检试验：对初筛呈阳性反应的样品用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的筛查试剂重复检测。如两种试剂复测均呈阴性反应，则报告HIV抗体阴性；如均呈阳性反应，或一阴一阳，需送艾滋病确认实验室进行确认（见图1）。样品筛查试剂阳性反应均阴性反应初筛检测阴性反应原有试剂加另外一种筛查试剂阳性反应一阴一阳均阳性反应送确认实验室确认 报告阴性八、性能指标：8.1精密性：分析内 CV% 15%（n=10） 8.2有效期：在
7、28贮存，有效期12个月。8.3交叉反应：对临床确诊的22例风疹病人血清、13例类风湿关节炎病人血清、15例系统红斑狼疮病人血清、16例干燥综合症病人血清、8例多肌炎病人血清进行HIV1+2型抗体检测未出现阳性。九、方法局限性：9.1本试剂盒仅用于血清或血浆样本的测定，对其它体液样本测定的可靠性尚未得到充分的实验确认。9.2此试剂不能用于HIV抗原的筛查。9.3低滴度的HIV抗体在感染的初期不能被检出，阴性结果不能排除HIV1、HIV2的感染。9.4变异的HIV1型（M群和O群）HIV2型可能出现假阴性，已知检测方法中，尚无法完全保证消除漏检。9.5加热标本可以影响结果。十、临床意义：10.1
8、 HIV抗体检测可用于监测、诊断、血液筛查。10.2 以监测为目的的检测是为了解不同人群HIV感染率及其变化趋势而进行的检测，检测的人群包括各类高危人群和一般人群。10.3 以诊断为目的的检测是为了确定个体HIV感染状况而进行的检测，包括临床检测和自愿咨询检测、术前检测、根据特殊需要进行的体检等。10.4 以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播HIV而进行的检测，包括献血员筛查和原料血浆筛查。十一、标本采集及处理： 1 检测标本种类要求：静脉血或动脉血的血清或血浆标本均可作为检测标本；溶血、脂血、黄疸血不宜使用，如需使用，应在报告单上注明“标本溶血/脂血/黄疸”。2 受检者准备：受检者无需做
9、特殊准备；3 标本采集及处理：宜空腹采集静脉血，无需抗凝，采用离心方法分离血清，分离血清应彻底，不含纤维蛋白；病人标本无需特殊制备处理，采用正确医用技术收集全血标本，离心分离后提取血清用于检测。使用抗凝剂（浓度为21.8mmol/L枸橼酸钠，5mmol/L EDTA-Na，15IU/ml肝素，10mmol/L草酸钠）不影响检测结果。4 标本保存：留取的标本最好在当天检测，不能立即检测的应放置于2-8不应超过3天，血清置于-20以下可长期保存，但应避免反复冰融。5. 同规格的塑料离心管；6 标本外送：如涉及到需要外送的标本，必须以规定的容器（0.5ml塑料离心管）存放并密封，并根据邮寄规则和要求
10、进行包装，运送时还要放入冰袋（2-8）或干冰（-10）由专人运送至指定地点指定接收人。7 标本拒收：凡与以上所述内容不符的标本，检验人员应向临床或就诊者说明拒收标本的原因，并提出解决的方案或建议。十二、注意事项：1 84消毒液等强氧化剂能引起发光底物液发生反应，导致结果误判，故发光操作实验室应禁止使用此类消毒剂.2 检测必须符合实验室管理规范的规定，严格防止交叉污染。所有样品、洗弃液和各种废弃物都应当按传染物处理。3 不要使用过期的试剂，操作前应仔细阅读使用说明书，严格按照说明书的操作程序进行，不同批号的试剂和包被板不能混用。包被板要干燥保存，用完后立刻放回密封袋中封严后保存。4 各试剂必须摇
11、匀后使用，用前应平衡到室温，严格控制每步反应的时间和温度。5 加样操作应快速准确手法一致，慢吸快打，不要使溶液粘到孔壁上，尽量缩短整个加样时间。6 每次加样完毕后，应用微量震荡器充分振荡混匀，并避免产生气泡防止溶液溅出。7 以洗板机洗板时，每孔注液量不应少于400l，洗板次数不少于5次，浸泡时间不短于10秒，并注意检查加液头是否堵塞。洗板完后还应在干净的吸水纸上扣干。8 以手工洗板时，每次洗液都应加满微孔，最后应在干净的无纸屑吸水纸上扣干以防止外源性过氧化物酶类似物或氧化还原物质与底物发生反应，影响检测结果的准确性。9 加发光底物液的加样器应专用，加样吸头应确保干净无污染，在加发光底物液的过程
12、中应避免加样吸头与板孔或手指接触，以防底物受到污染而造成本底升高。10 为防止样品蒸发及避免污染，温育时应将反应板放于密闭干净的塑料袋内或用不干胶覆盖。11血样品应充分离心，3000转/分钟离心6分钟以上，使血清（浆）不含纤维蛋白及红、白细胞，否则会引起假阳性结果。十三、参考文献：1 WS/T227-2002 临床检验操作规程编写要求2 Boscato LM,Stuart MC. Heterophilic antibodies; a problem for all immunoassays.Clin Chem 1988:34:27-333 全国艾滋病检测技术规范（2004年版） 中国疾病预防控制中心 2004.815
