1、SBS Genetech产品说明书LipoMaxTM转染试剂咨询电话：400 666 3029产品描述：LipoMaxTM是一款新开发的真核细胞核酸转染专利试剂。它具有多重优势：在多种细胞中具有超高转染效率； DNA-LipoMaxTM复合体可直接加入细胞培养液中，有无血清均可；多数细胞转染后不必换液，少数敏感细胞可在转染后4-6小时换液去除DNA-LipoMaxTM复合体。试剂与储存：LipoMaxTM为浓度5 mg/ml的液体试剂。4度保存。请勿冷冻。货号体积32010（试用装）0.05 ml32012 1.5 ml产品质量：LipoMaxTM转染试剂在HEK293和小鼠滋养层干细胞(TS
2、)进行过大量的测试LipoMaxTM转染试剂无微生物污染。重要参考：1. DNA (g)与LipoMaxTM (l)的比例适用于1：2至1：3。以24孔板的一个孔为例，转染0.3-2.0105细胞可用0.5-1 g DNA与1-3 l LipoMaxTM混合。针对具体实验，调节DNA/LipoMaxTM比例可以优化转染效率。2. LipoMaxTM细胞毒性低，多数细胞转染时的细胞密度可适用较宽范围，如50-90%，60-80%的细胞密度通常可以获得较好的转染效果，具体细胞以优化后条件为准。3.转染时，不必使用无抗生素培养基。4.可以用Opti-MEM或其它无血清培养基，如DMEM,来稀释DNA
3、与LipoMaxTM。如用其它无血清培养基稀释，需要优化条件。转染步骤：以24孔板一孔为例。贴壁细胞：转染前一天接种适量细胞以达到第二天转染时50-90%的细胞密度，如0.3-2105。悬浮细胞：转染当天接种4-8105细胞于1孔24孔板中。1.按如下方法混合制备DNA-LipoMaxTM复合体将适量DNA稀释在25 l Opti-MEM无血清培养基中，混合均匀。轻轻混匀LipoMaxTM，吸取适量体积稀释在25 l Opti-MEM无血清培养基中，混合均匀并置于室温5分钟。注：稀释后的DNA与LipoMaxTM应在30分钟内混合，超过30分钟可能会降低效果。如果用DMEM来稀释LipoMax
4、TM，则应在10分钟内与DNA混合。 5分钟后混合稀释好的DNA与LipoMaxTM，共50 l，混合均匀并室温放置20分钟以形成复合体。注：该复合体在室温中可保持稳定至少5小时。2.将50 l DNA-LipoMaxTM复合体加到细胞培养皿中，轻轻摇晃培养皿混匀。3.在37度CO2培养箱中培养24-48小时之后进行转染效率检测。转染后4-6小时换液不会降低转染效果，换液不是必须的。稳定细胞系筛选：转染24小时后，以1:10或者更高的比例传代细胞，第二天加入筛选抗生素。悬浮细胞：加入转染复合体4小时后在细胞培养基中加入PMA或PHA。为促进Jurket细胞CMV启动子活性和基因表达，PHA-L
5、和PMA的终浓度分别为1 g/ml和50 ng/ml。对于K562细胞，单独加PMA可有效促进基因表达。放大或缩小转染体系：转染除24孔板之外的其它细胞培养皿中的细胞，可根据培养面积按比例调整DNA，LipoMaxTM，细胞量和培养基体积（参见下表）。对于自动化，大规模96孔板体系，建议混合大体积的转染复合体。注：可通过将悬浮细胞直接加入96孔板中混合的转染复合体实现快速操作。悬浮细胞密度应为常规细胞接种的2倍。培养皿单孔培养表面积(cm2)相对面积（对比24孔板1孔）单孔培养基体积DNA (g)与稀释体积LipoMaxTM(l)与稀释体积96孔板0.3 0.2 100 l 0.2 g in
6、25l 0.5 l in 25l24孔板2 1 500 l 0.5 g in 25l 1.5 l in 25l12孔板4 2 1 ml 1.0 g in 50ul 3.0 l in 50l35 mm 10 5 2 ml 2.5 g in250 l 7.5 l in 250l6孔板10 5 2 ml 2.5 g in250 l 7.5 l in 250l60 mm 20 10 5 ml 5.0 g in 0.5ml 15 l in 0.5ml10 cm 60 30 15 ml 15 g in 1.5ml 45 l in 1.5ml优化转染条件：可通过调整DNA, LipoMaxTM浓度，细胞密度以获得最高转染效率和降低对细胞的非特异性影响。可在50-90%之间调整细胞密度。DNA(g)与LipoMaxTM(l)比例可在1:0.5到1:5范围内调整。
