1、橰R(怀剜迵瀂剪怀剜讀缁缀 力鄐頀h椀霂甃甃甃蘄岉葧葎魶葧魧遒葧葶豶谀董瀀瀀琀瀀椀挀最椀昀蘀岉葧葎魶葧魧遒葧葶豶賿董瀀瀀琀尀尀愀昀挀昀攀愀戀愀愀愀昀昀倀愀欀攀吀焀欀戀唀砀堀儀氀搀刀稀甀漀挀栀氀圀礀攀礀戀洀挀最匀一眀蘀岉葧葎魶葧魧遒葧葶豶谀董蘀尀葧遒葶谀萀扎挀攀攀愀搀攀挀搀攀攀昀挀搀搀挀攀A栀a罢鸀匀氀礀樀稀洀渀欀砀焀甀搀栀爀焀儀一刀栀唀伀一洀焀唀爀圀娀搀唀戀洀倀栀攀洀夀洀贁錀蘀D務HRQ阀RR胔-R耀耀棙Li縀$区域多维发展综合测度方法及应用 .pptpic1.gif区域多维发展综合测度方法及应用.ppt2019-82243c262db-fd78-4a03-81fb-c17cb8a9451bb
2、HuzE9k4fAzWl5+19WKrDWW5q1Og8diyicpCexORgHExzwEcXKiCCg=区域多维发展综合测度方法及应用,区域,多维,发展,综合,测度,方法,应用df8520da4c1f25a5996aca7800c934a5区域多维发展综合测度方法及应用 徐勇 , 段健 , 徐小任 1. 中国科学院地理科学与资源研究所 , 北京 100101 2. 中国科学院大学 , 北京 100049 图 1 区域多维发展指数八面体法示意图 地理学报 ,2016,71(12),2129-2140.DOI:10.11821/dlxb201612005 瓦拉西瓦0000100008实施方案2
3、0190822222519880198mmeTtHiy4LIfoYcQBtZD1lt6coMojFY3NR6IX9Gz5cItATNjZS8k29Gp8L8FUJt2Q0t述R(劇儀迵劏劇讀缁力偠頀h椀伃侃伃圃欃猃猃猃鬃鬃鬃鬃鬃鬃鬃鬃鬃鬃鬃鬃鬃鬃鬃鬃渄鹧瀀瀀琀瀀椀挀最椀昀渀鹧瀀瀀琀尀尀昀攀昀挀挀挀搀戀愀昀攀搀挀焀瘀儀戀儀欀瘀堀眀昀稀圀儀氀攀戀戀倀琀欀栀搀吀吀栀倀爀爀一洀猀戀儀渀鹧渀鸀暏搀愀挀愀愀昀昀攀昀搀帀栀u罢鸀嘀圀堀最吀娀洀攀栀瀀愀瀀洀氀爀最猀娀倀唀最最欀焀嘀挀漀琀倀礀砀栀娀椀伀攀愀昀吀猀戀倀谁錀蘀D頀勘瀀!HRQ阀RR胔-R怀怀棙Mi縀$草情景6 产品策略 .pptpic1.gif情景6
4、产品策略.ppt2019-822ba19fa1f-ec7d-4ead-8b7a-bdc786f1665437ob0spDq15nmIHoNqh54ItH1O2zswZPdo7tv+zRyv90/Tb2SgJd/A=情景6,产品策略,情景,产品,策略d2cabc4b1d16adff3af9382f6bd8a605暾%常%畬%瓦拉西瓦0000100008实施方案20190822222519677219+fCr4xcpW+8WpKYN61J8O54pGcZgxTb2ulgEuJ/cr+KFtQ8TKqviC1sqFnpsq/3FQ熀耀x偄V%=嘴L62b8c2fc560ff0b98e3742d514
5、c2a2c8L62b8d1a3973f6272a6f0e69483a0a4caL62b8dd64f252a6146218051fa44a56f6L62b8dd64f252a6146218051fa44a56f6L62b8df7f6faef0b1a7409f48021fa8c7L62b8e16c4507127a58f4805e1814b80dL62b8efc74a63c4a712db98bf2bc0e2b0缶L62b9054f7580e10f1982de505e0e443fL62b905879e4511f09796c7abe71d6826L62b90f2ff05e062c6fb2cbed165d
6、788f輶L62b935ee89f8fae58a24a9378adfed9fL62b96045e2037a0937411cd385909e17L62b902744b3603bc7039a7dd4392e4e3踶L62b9b07cb330aad83ac9743646bde0f4L62b94238b7d9be496a952faf9eeb4c2dL62b8d88faac36d2a85a3e40e68ca912cL62b94ba8a77f05abe18808f8cb847a09L62b999b69dda14c742310f5d2c29dff8L62b90624611cb2475c9bb74d34251
7、70cL62b91f23b67d7af0351b2d8cc15685baL62b9442114f6a8f1f4595b853c655dd9L62b976db6fa6d85bd98fb26135a0e8ceL62b98142632960c5e0d2a6e40e8ea2e86L62b96bd1278519ebb4fb614f7231f79c謶L62b8ffe4870310746f98b4d133394ad1L62b92b5546b1ed1d70e7af6619226fbcL62b91f03eed685b87b88da75fdea40cb鰶L62b8d975362a062e6eaead8c0ae5f
8、e95L62b9400e2cff0f9d5f59463b62393ac8L62b922a8e20dbb1e7edfdae9804d3e12眶L62b9286c7421a76384ff62d47f2949bbL62b94a56ea5fbfecacb2c14351f20242L62b969170348682e90530c83ece45312R(勜%迵勾勜讀缁匫灰頀h椀夃妃夃愃甃紃紃紃舄啙饤晒瀀瀀琀瀀椀挀最椀昀舀啙饤晒瀀瀀琀尀尀搀戀愀搀挀愀挀愀挀愀愀挀挀挀堀琀刀倀欀娀栀愀匀匀吀圀娀夀氀洀一最嘀眀嘀最欀甀圀愀挀吀圀嘀欀刀猀琀攀舀啙饤晒舀啙饤晒攀戀攀挀愀愀愀挀愀昀愀挀戀昀栀x罢鸀瀀洀猀昀堀瀀栀樀樀愀瘀伀
9、爀瀀椀渀爀琀圀欀瀀稀稀欀椀堀瘀猀吀伀伀焀挀伀砀昀琀樀刀輁錀蘀D勾HR阀RR胔-S棙Li縀$荝如何撰写教育教学活动方案 .pptpic1.gif如何撰写教育教学活动方案.ppt2019-8222daa27af-adc6-4337-b189-ff4c2057ae09+Ydvq9r5CTbojT+6EKwzLWbWeLsRtGw1gbAYO5SmDBAWvO/4A/nMqw=如何撰写教育教学活动方案,如何,撰写,教育,教学,活动,方案a342b4532fd4c6e571bca5342a32b810%瓦拉西瓦0000100008实施方案20190822222526885279K+3JO2/Wevf+r
10、g7MCEejH611kPCqDG0GxKLoi/z2CguuFlU2wPpGDxj/nhJeW5kR0S(匉儀迵氒匢匉讀缁匫到頀h椀脃脐脐褐鴐休舑啙Y瀀瀀琀瀀椀挀最椀昀舀啙Y瀀瀀琀尀尀攀搀戀挀攀攀搀昀昀攀昀椀嘀挀栀焀攀稀攀樀一瀀搀伀圀樀攀一刀挀伀愀娀欀瀀漀瘀堀洀唀刀瀀吀瘀洀眀嘀稀儀舀啙Y舀啙搀戀昀戀攀戀攀挀挀搀舀啙陏饮P艨啙陏饮P眠睫硔硔譒譒牼蝿牼蝿鐀魗譪鑢魗譪洀恛浩恛眠睫硔硔譒譒牼蝿牼蝿趎絜趎絜葎诿艏溊葎诿艏溊嵽溈嵽溈眠睫硔硔譒譒牼蝿牼蝿溊譖溊譖u鍷u鍷眠睫硔硔譒譒牼蝿牼蝿疕垓疕垓愀渀搀愀渀搀謀謀漀爀漀爀眠睫硔硔譒譒牼蝿牼蝿魓浵魓浵乥乥斐斐瘠譒癵譒豻鵖衎豻鵖衎簀糿楩楩楩楩腎極硲極腎極硲極砀
11、摗偫砰摗偫谀楒谰楒卢卢汛煑轹汛煑轹漀孢漰孢眠睫硔硔譒譒牼蝿牼蝿硙梊硙梊眠睫硔硔譒譒牼蝿牼蝿眠睫硔硔譒譒牼蝿牼蝿簀籎糿糿摜鍫硙摜鍫硙搀撋簀糿琀琀眠睫硔硔譒譒牼蝿牼蝿錀窐杦轜鍤窐杦轜彨彨罢鸀瀀猀一漀儀琀礀吀儀甀洀夀堀礀戀搀氀夀焀倀瀀挀焀洀甀唀砀椀瀀渀氀栀倀渀稀倀礀刀2R(勜%迵勾勜讀缁匫灰頀h椀夃妃夃愃甃紃紃紃舄啙饤晒瀀瀀琀瀀椀挀最椀昀舀啙饤晒瀀瀀琀尀尀搀戀愀搀挀愀挀愀挀愀愀挀挀挀堀琀刀倀欀娀栀愀匀匀吀圀娀夀氀洀一最嘀眀嘀最欀甀圀愀挀吀圀嘀欀刀猀琀攀舀啙饤晒舀啙饤晒攀戀攀挀愀愀愀挀愀昀愀挀戀昀栀x罢鸀瀀洀猀昀堀瀀栀樀樀愀瘀伀爀瀀椀渀爀琀圀欀瀀稀稀欀椀堀瘀猀吀伀伀焀挀伀砀昀琀樀刀S(匞儀迵頒匣匞讀缁
12、匫頀h椀弚朚朚朚輚輚輚輚輚輚輚輚輚輚輚輚輚輚輚輚漛祎瀀瀀琀瀀椀挀最椀昀漀祎瀀瀀琀尀尀昀搀戀戀戀戀昀愀昀昀戀戀昀攀猀倀樀堀樀砀樀礀一猀椀椀最瀀渀最匀刀樀椀攀焀戀洀洀刀昀洀瘀猀氀瀀最漀祎漀礀攀戀戀攀挀昀戀戀搀搀搀昀挀愀攀搀搀漀祎缀匀倀爀漀樀攀挀琀禈蔀腣薉腣瘀倀爀漀樀攀挀琀攀瘀祒瘀邑瘀神艎艎倀爀漀樀攀挀琀攀斕瘀倀爀漀樀攀挀琀耀瘀祒瘀缀葔瘀栀倀爀漀樀攀挀琀聎瘀倀爀漀樀攀挀琀江葑v翿潵福澘蹒貀屝澋福蒖屝葧潏祶獎祑萀豧達n踰葿扟慟瞌卑祳襗鉛谀達瘀轺苿鑎匀伀昀昀椀挀攀潏拿祣葶v葒禀祛退豮癔牶禍倀爀漀樀攀挀琀萀瘀椀挀爀漀猀漀昀琀伀昀昀椀挀攀倀爀漀樀攀挀琀匀琀愀渀搀愀爀搀蹗圀椀渀搀漀眀猀萀扶轺鑨啎祓墘瘀椀挀爀漀
13、猀漀昀琀伀昀昀椀挀攀倀爀漀樀攀挀琀倀爀漀昀攀猀猀椀漀渀愀氀蹗圀椀渀搀漀眀猀萀扶轺鑨卞琀愀渀搀愀爀搀葲豶琀祥罧傏爀漀樀攀挀琀匀攀爀瘀攀爀膗蒉祥谀齏偒爀漀樀攀挀琀倀爀漀昀攀猀猀椀漀渀愀氀倀爀漀樀攀挀琀匀攀爀瘀攀爀椀挀爀漀猀漀昀琀萀祎渀琀攀爀瀀爀椀猀攀倀爀漀樀攀挀琀愀渀愀最攀洀攀渀琀倀葔桎瘀椀挀爀漀猀漀昀琀伀昀昀椀挀攀倀爀漀樀攀挀琀匀攀爀瘀攀爀蹗蕎呑冀萀偾爀漀樀攀挀琀倀爀漀昀攀猀猀椀漀渀愀氀缀葏屔栰梈貈桔祾瘀椀挀爀漀猀漀昀琀伀昀昀椀挀攀倀爀漀樀攀挀琀圀攀戀挀挀攀猀猀翿倀爀漀樀攀挀琀匀攀爀瘀攀爀葵蹗渀琀攀爀渀攀琀砀瀀氀漀爀攀爀萀戀瘀椀挀爀漀猀漀昀琀伀昀昀椀挀攀倀爀漀樀攀挀琀倀漀爀琀昀漀氀椀漀匀攀爀瘀攀
14、爀倀漀爀琀昀漀氀椀漀倀爀漀樀攀挀琀萀祒瘀偒爀漀樀攀挀琀倀爀漀樀攀挀琀椀挀爀漀猀漀昀琀伀昀昀椀挀攀萀v瘀祎蜀葎唠罪魣虏葶祒瘀祠庘蜀葎唠幓瘀渀潏禋葎潏礠喘祓缀葔瘀倀爀漀樀攀挀琀遒豧酿潏祦瘀葔睶葔葹T荖祦潏蒖扥瘀罓u祵盿彜罔瘀祵虑葎潏扎打百萀蹒敎潏豠遒鎕祾瘀退屝桏桎扨遑葮潏瘀退置k過葒道葮倀爀漀樀攀挀琀葎瘀k葎遧萀瘀虥葎扶葎慒瘀儀葎玕倀爀漀樀攀挀琀葎瘀靎青靫搰葫摖k葎遢S遢葮潏倀爀漀樀攀挀琀葎栀瘀倀爀漀樀攀挀琀魣譏著桶筹棰栀蹵华灢栀蹵倀爀漀樀攀挀琀葎湶祑灒鍥砀挀攀氀嘀椀猀椀漀睝祢驲葟桶瘀倀爀漀樀攀挀琀魣虏驙葛桶擿蒋骁桛栀層瘀偧爀漀樀攀挀琀葎桧桨瘀栀蒈瘀桓蔀腣薉腣瘀倀爀漀樀攀挀琀攀瘀祒瘀邑瘀神豻艎神豻
15、艎神瘀攀潏鍠瘀瘀攀潏鍠瘀攀豔鍧瘀攀豬敔蕑鍣蹵葎潏苿葎喋蔀蹵祎驲塒祐S蝎0蝎葎祶驲湏祖兎养畿萀潏瘀攀酺鍸福酺葎膑讉棿y祧萀瘀塞腤葶塵腤桎堰腤葎祵萀偶湎驸茰瘀祧驲葛轶豞鵔窕嚘玍斔褀鉛葎辈杒穢蔀腣薉腣瘀倀爀漀樀攀挀琀攀瘀祒瘀邑瘀神艎邍艎邍瘀退豣葎b蒗豎禍塒溋邍邍瘀邑蹒咉颕缀虢豎葎屝豔虣豎b屝葏湶遒秿炍退葙屝鶍舀遙退葙躁蕎虑過萀鮀珿邑蕔虑靎秿蒘渀避瘀瀀爀漀樀攀挀琀過坔桎蒈塶啥忿聢桎蒈b塎啒塎堰瘀造屝桏湎達邑瘀渀絿葙遶k蔀腣薉腣瘀倀爀漀樀攀挀琀攀瘀祒瘀邑瘀神艖禎艖禎瘀挀湫啶齫祎皏颕豙豔苿鱙燿R祔豶葢齶賰萀蹙蹜塏塏祑瘀脀掉湫葶膗祥枘祜麘枖谀齔鼰瘀愀猀攀氀椀渀攀膑蒉苿祙萀谰逰豮蒑瘀塏葛蹵瑎葔鹒枖湨祶瘀葞v杣
16、豱肏啻鑒豎鹎荑葎瘀g葎屝豝屝繏R葎屝攰瘀攀葎豙豙鍔鹒R茰罢鸀瀀瀀洀攀攀吀渀愀儀伀昀漀漀椀匀嘀唀氀樀刀稀夀圀栀瘀伀攀瀀吀刀刀 Oligo (dT)15-18 TTTTT15-18 cDNA 第一链 CCCCC TTTTT15-18 cDNA 第一链 nCCCC nGGGG cDNA 第二链 克隆扩增， 5 端测序分析 反转录酶的末端转移酶活性 Oligo (dG)15-18 mRNA 与线性载体相连接 要求： cDNA 的 5 端完整无 缺 目 录目 录 2. 2. cDNA 末端快速扩增技术末端快速扩增技术 ( (RACE) ) 传统的传统的 RACE ： AAAAAn mRNA AAAAAn
17、 TTTTT15-18 cDNA mRNA -5 3- 反转录酶 Oligo (dT)15-18 末端转移酶 dGTP TTTTT15-18nGGGGG 锚定 PCR 扩增 TTTTT15-18nGGGGG nCCCCC 锚定引物 特异引物 PCR 产物 目 录目 录 Deep-RACE ： 用寡核酸替代苷mRNA 的 5 端帽结构 以及光巢氏发标记PCR 引物高通量定实现鉴 起始点转录 AAAAAn 5-p 帽 mRNA 牛小肠磷酸酶 (CIP) AAAAAn 5- 帽 烟草酸焦磷酸酶 (TAP) AAAAAn5- 将 5-RACE adaptor ( 寡核苷 酸 ) 加到脱帽 RNA 分子
18、上 AAAAAn 5-RACE adaptor ( 寡核苷酸 ) 反转录酶 10nt 随机引物 目 录目 录 5-RACE adaptor 5-RACE adaptor 5-RACE adaptor 5-RACE adaptor 长短不同的 cDNA 随机引物 用 10nt 随机引物与 5-RACE 引 物进行 PCR 扩增 5-RACE adaptor 5-RACE adaptor 5-RACE adaptor 5-RACE adaptor PCR 产物 随机引物 以 5-RACE 引物和 5 端甩尾的基 因特异性反向引物进行巢氏 PCR 5-RACE adaptor 以 5-RACE 发光
19、标记引物对 PCR 混合物直接进行一次性测序 分析基因转录起始点 目 录目 录 3.3. 连续分析基因转录起始点连续分析基因转录起始点 在 RACE 的基 上，通在本础过转录5 端引入 一特殊的个II 型限制性核酸切酶位点，内识别 了基因实现5 端短片段串接物一次联连产测 序分析多基因起始点的目的个转录 主要有两种方法： 5 端 分析基因表连续达（ 5 -end serial analysis of gene expression, 5 SAGE ） 帽分析基因表达（ cap analysis gene expression, CAGE ） 目 录目 录 (1) 5 SAGE 5SAGE 是在
20、 PCR 程中过将 MmeI 酶切位点引物 cDNA 的 5 端，通酶切和接得不同短片段重序列，过连获复并 重序列行序得大量片段序列信息 对复进测获 不同序列的短片段代表不同基因的 起始点 转录(TSS) MmeI: 是一 特殊的种II 型限制性核酸切酶内 的序列不是回文，而是不的识别结构对称DNA 序列 5-TCCRAC-3 （ R 代表 G 或 A ） 在 位点下游识别1820基切碱处开双链 DNA 目 录目 录 GpppAAAAAAAAn mRNA 用 BAP 和 TAP 处理 AAAAAAAAnp 在 RNA 的 5 端加上寡核苷酸帽 AAAAAAAAn5 XhoI MmeI 反转录酶
21、 RT 5 AAAAAAAAn5 cDNA PCRBiotin- 标记引物 随机引物 5 5Biotin MmeI 酶切消化 5 20 mer 5Biotin亲和素 用亲和素 - 生物素，可以将 5- 端 片段与其他片段分离开 目 录目 录 5 20 mer 连接 5Biotin 5Biotin 5 20 mer PCR 扩增 5 5Biotin 5Biotin 5 XhoI酶切消化 自身连接 串联体 测序分析 目 录目 录 (2) CAGE CAGE 与 5SAGE 非常相似 所不同的是 : CAGE 不需要在 RNA 上加接，而是用头 oligo(dT) 引物先行第一进链 cDNA 的合成
22、 然后通 捕帽，含有过获结构将MmeI 和另一内 切酶位点如 XmaJI 的 linker 加到全单链长 cDNA 的 3 末端 目 录目 录 AAAAAAn Cap mRNA 反转录酶Oligo (dT)1518 AAAAAAn Cap TTTTTTTn cDNA 捕获 5- 帽结构 单链 linker 连接 TTTTTTTn Biotin cDNA 第二链的合成 TTTTTTTn AAAAAAn MmeI XmaJI MmeI 酶切 亲和素 20 mer 用亲和素 - 生物素，可以将 5- 端片段与其他片段分离开 目 录目 录 连接第二个 linker XbaI XmaJI XmaJI,
23、Xbal酶切消化 PCR （用 linker1 和 linker2 作引物） Linker 1Linker 2 纯化，串联连接，克隆 20 mer XmaJI 和 XbaI 是同尾酶： XmaJI ： CCTAGG XbaI ：TCTAGA 串联体 测序分析 目 录目 录 第三节 启动子的结构及功能分析 目 录目 录 主要内容：主要内容： 一、启动子的结构分析一、启动子的结构分析 二、启动子的功能分析二、启动子的功能分析 目 录目 录 启动子（ promoter ） 是一段能被蛋白 的、特定基因质识别参与转录 控的调DNA 序列 II 型 子通常位于基因的上游启动结构 共通序列 (consen
24、sus sequence)是其特征性序列 共通序列和启动子所处的位置是研究 启动子的重要线索 目 录目 录 +10 +20 Start site -10-20-30-40 +1 ATG -3+5 Initiator 共通序列 例如： 原核基因的共通序列： -10：区Pribnow box （ T77A76T60A61A56T82 序 列） -35：区T69T79G61A56C54A54 序列 核基因的共通序列：真 核基因子在真启动-50域附近（大区约 5%30% 基因子在启动-25-30域）有区TATA box （ TATAAA 序列） TATAATTTGACA 目 录目 录 一、启动子的结构分析一、启动子的结构分析 主要方法： 利用 PCR 技术克隆启动子 利用核酸 - 蛋白质相互作用方法研究启动子 生物信息学预测启动子 目 录目 录 （一）利用（一）利用 PCRPCR 技术克隆启动子技术克隆启动子 特异性基因序列 基因上游序列基因组 DNA 根据基因序列合成一条反向引物 正向引物用随机引物 PCR 扩增 随机引物 特异引物 克隆及测序分析 注意： 真核基因有内含子，应该根据 mRNA 序列设
