1、第二节 发酵工程的无菌技术（第2课时）u 教学目标1熟悉常见的无菌操作器具。2掌握微生物接种和传代的方法。3尝试完成斜面接种和培养微生物。u 教学重难点【教学重点】1微生物接种和传代的方法。2斜面接种和培养微生物。【教学难点】斜面接种和培养微生物。u 教学过程【新课引入】【教师活动】提问：发酵工程的灭菌方法有哪些？会用到哪些灭菌设备呢？学生思考和作答：化学试剂灭菌法；射线灭菌法；干热灭菌法（电热鼓风干燥箱）；湿热灭菌法（高压蒸汽灭菌锅）；过滤除菌法（空气除菌设备）。【过渡】借助发酵设备，使用一定的灭菌方法可以对发酵过程中使用到的培养皿等实验器具进行进行灭菌。发酵工程有哪些常用的无菌操作器具呢？
2、【新知讲解】一、发酵工程的无菌操作器具【学生活动】阅读课本第1819页发酵工程的无菌操作器具的内容，思考：常用的无菌操作器具有哪些？如何使用移液管量取一定体积的溶液？【教师活动】针对学生对上述问题的回答情况，为学生一一解答。1接种器具在无菌条件下将微生物接入培养基的操作过程称为接种。在这一操作过程中，常用的接种器具包括玻璃涂布器、接种针、接种环等。2转移器具（1）作用用来准确移取一定体积的溶液或分装化学试剂的量器，一般用于转移部分液体培养物、系列稀释微生物或分装化学试剂。（2）常用规格常用的移液管有1 mL、5 mL、10 mL和25 mL等规格。【教师活动】播放移液管的使用操作视频，引导学生
3、总结移液管的使用步骤。（备注：有条件的班级可以让学生尝试操作移液管。）（4）微量移液器当取液量很少时（如0.1 mL），常采用微量取液器。微量取液器可分为固定容量的和可调容量的两种。3超净工作台一种经过空气净化而形成高洁净操作环境的设备。（1）原理：利用工作台内紫外线灯的杀菌作用，并通过空气过滤器过滤确保工作台内空气的无菌、无污染。（2）注意事项：超净工作台开机杀菌30 min后，需先关掉紫外线灯，约10 min后方可使用超净工作台。（3）优点：操作方便。在各种无菌操作和发酵工程产品的工厂化生产中，超净工作台是理想的无菌操作设备二、微生物接种和传代的无菌技术【学生活动】阅读课本第19页微生物接
4、种和传代的无菌技术的内容，思考：（1）菌种是什么？（2）菌种保存的生理状态是怎样的？（3）菌种保存的条件和方法是什么？1菌种保存和传代的原理（1）菌种菌种是食用菌、工业菌、农用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料，是从事发酵工程实践及微生物学等学科研究的基本材料和重要资源。（2）微生物保存的生理状态在人工创造的条件下，降低细胞的代谢水平，使细胞基本处于休眠状态，即微生物的生长繁殖受到抑制但又不至于死亡。（3）菌种保存的条件：低温、干燥、真空。（4）菌种保存的方法厌氧微生物接触氧气会受到抑制、损伤甚至死亡，常采用穿刺接种。斜面接种是常用的菌种传代和低温下保存菌种的方法。拓展1 菌种保存的常见方法（
5、1）传代培养保藏法：包括斜面培养、穿刺培养等，培养后于46冰箱内保存。（2）液体石蜡覆盖保藏法：在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间。（3）载体保藏法：将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法。（4）甘油管藏法：利用微生物在甘油中生长和代谢受到抑制的原理达到保藏目的。（5）冷冻干燥保藏法：先使微生物在极低温度（70左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分。2斜面接种和培养酵母菌【学生活动】阅读课本第20页的内容，初步认识斜面接种和培养酵母菌的操作过程。（1）准备接种点燃酒精灯，取两支盛有培养基的试
6、管，其中一支内有菌种，另一支为无菌的斜面培养基。用一只手的拇指和其他四指夹住试管，使管口齐平，管内培养基斜面向上。（2）接种环灭菌将接种环的环端和接种时可能进入试管的部分放在酒精灯火焰上，来回灼烧多次，彻底灭菌。（展示接种环灭菌的操作图示。）（3）试管口灭菌在火焰附近用握有接种环的手的小拇指、无名指、中指和掌心拔去两支试管上的试管塞，迅速将试管口通过火焰23次，以杀灭试管口上的微生物。（4）挑取少许菌体将灭过菌的接种环伸入菌种管，先将环部接触培养基斜面顶端或其他无菌体的培养基部位使其冷却，再轻轻挑取少许菌体。注意：在抽出接种环时，注意其带菌部位不要触及管壁或通过火焰。（5）划线接种迅速将上述带
7、菌的接种环伸入待接种的试管中， 在培养基斜面上由底部向上轻轻划“Z”型折线，将菌种接种到培养基上。注意：划线时注意不要将培养基的表面划破。（6）培养将试管口与试管塞分别通过火焰23次，迅速塞紧试管。多次灼烧接种环确保无菌，冷却后，放回原处。将接种过菌种的试管放在恒温箱中（温度调至28）培养24 h。【学生活动】根据实验操作流程进行酵母菌的斜面接种和培养。在此过程中注意不到烫伤、划伤。【结果分析与评价】（1）培养24 h后，能观察到的实验结果是什么？如何将酵母菌培养在平板培养基上？能观察到“”型折线分布的酵母菌菌落。将无菌种的斜面培养基改为平板培养基，通过平板划线法或稀释涂布平板法可将酵母菌培养
8、在平板培养基上。（2）在上述接种和培养过程中，我们注意到了哪些灭菌操作注意事项？在酒精灯附近操作；灼烧接种环，在火焰旁冷却；将试管口通过火焰；接种完成后，再次灼烧接种环。【课堂小结】引导学生以思维导图的形式总结本节课内容。【课堂检测】1（多选）下列关于发酵工程中使用的无菌操作器具，叙述错误的是（ AC ）A接种针常用于斜面接种或在平板培养基上划线接种B超净工作台是一种经过空气净化而形成高洁净操作环境的设备C将移液管插入待取溶液液面下时，伸越多取液越方便D玻璃涂布器一般用于平板稀释涂布接种2为了保持菌种的纯净需要进行菌种的保存，下列有关叙述错误的是（ D ）A对于频繁使用的菌种，可以采用临时保存的方法B甘油管藏法保存菌种时使用的甘油需灭菌C临时保藏菌种容易被污染或产生变异D对于需要长期保存的菌种，可以采用低温4保藏的方法3将酵母菌菌种从菌种试管接种到另一支试管的操作，下列说法有误的一项是（ B ）A整个接种过程都要在酒精灯的火焰附近进行B接种环放在酒精灯火焰上灼烧之后即可伸入菌种试管挑取少许菌种C菌种试管口和待接种的试管口接种前后都要通过酒精灯火焰23次D带菌的接种环应在培养基斜面上由底部向上轻轻划“Z”型折线 8 / 8
