1、第二节 发酵工程的无菌技术（第3课时）u 教学目标1概述平板划线法的原理和操作方法。2尝试完成通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落。u 教学重难点【教学重点】通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落。【教学难点】通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落。u 教学过程【新课引入】展示酵母菌的资料。酵母菌是单细胞真菌，可以进行出芽生殖，也可以进行孢子生殖。其培养的最适pH为4.55.0，最适生长温度一般为2830，可以用液体培养基培养，也可以用固体培养基培养，但要获得纯化的酵母菌菌落，则需通过固体培养基培养。思考：如何获得纯化的酵母菌菌落？使用平板划线法获得纯化的酵母菌菌落。【新知讲解】一、平板划线法【学生活动
2、】阅读课本第21页的内容，理解平板划线法的概念和原理，并初步认识平板划线法的操作方法。1概念把含有多种微生物的杂菌样品，通过在特定的琼脂平板表面划线稀释，从而获得单个菌落的方法。2原理将微生物样品在琼脂平板表面多次做“由点到线”的稀释划线，经过这样的操作可得到较多独立分布的单个微生物。经过平板培养后，会形成部分由单个微生物生长、繁殖而成的纯种菌落。3操作方法展示知识卡片：【知识解析】平板划线法分离和培养酵母菌拓展 平板划线的其他方法（1）五区划线法灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线。注意不要将最后一次的划线和第一次的划线相连。（2）几
3、种划线方法示意图二、通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落（一）目的要求尝试通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落。（二）实验原理马铃薯葡萄糖琼脂培养基能满足酵母菌生长、繁殖的营养需要，利用前面实验中配制的马铃薯葡萄糖琼脂培养基制作平板。平板划线法是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法之一。在制作好的酵母菌培养基平板上，采用无菌操作技术及平板划线法能够获得纯化的酵母菌菌落。（三）实验器材和试剂酵母菌样本（菌种）；接种环、酒精灯、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅；马铃薯葡萄糖琼脂培养基。（四）实验步骤1培养基和培养皿灭菌【学生活动】思考使用哪种灭菌方法和设备进行灭菌？（高压蒸汽灭菌法）将配制好的马铃薯葡萄糖
4、琼脂培养基装入锥形瓶，用棉塞塞紧，并用牛皮纸包住棉塞扎在瓶口上，置于高压蒸汽灭菌锅中；用牛皮纸等将培养皿包好（一般35套一包）后也放入高压蒸汽灭菌锅中，与培养基一起灭菌。2倒平板待培养基冷却到50左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。拔出锥形瓶的棉塞。将瓶口迅速通过火焰。用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基（1020 mL）倒入培养皿，立即盖上培养皿盖。等培养基冷却凝固后，将培养皿倒过来放置。展示知识卡片：【知识解析】倒平板；【生物世界】倒平板的注意事项【教师活动】引导学生思考以下问题：（1）倒平板时，为什么在酒精灯火焰旁操作？酒精灯火焰旁是无菌区域，可以避免周围环境中的微生物的污
5、染。（2）倒平板时为什么要使锥形瓶的瓶口通过火焰？通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。（3）平板冷凝后为何要倒置？防止皿盖上的冷凝水珠落入培养基，避免培养基中的水分过快蒸发。展示知识卡片：【生物世界】平板划线法操作的注意事项3划线和培养在平板上划线，然后置于28恒温箱内培养。【学生活动】根据实验操作流程进行倒平板和划线。在此过程中注意不到烫伤、划伤，操作要规范。【教师活动】关注学生操作是否规范，并进行指导。学生完成实验操作后，引导学生思考每次划线前后灼烧接种环的目的是什么？灼烧时间目的第一次划线前杀死接种环上可能存在的微生物，防止外来微生物干扰每次划线前杀死上一次划线结束后接种环残留的菌
6、种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端划线结束后杀死接种环上残存的菌种，避免菌种污染环境和感染操作者（五）结果分析与评价1在接种酵母菌的培养基上，你是否观察到了单菌落？如果你观察到了不同形态的菌落，可能是哪些原因引起的？如果观察到单菌落，培养基上生长的菌落颜色、形状、大小等基本一致，说明接种成功。若培养基出现了其他菌落，说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，可能是菌种不纯、培养基灭菌不彻底或实验过程中被杂菌污染。2若培养基出现了其他菌落，如何检验培养基是否被杂菌污染？将未接种的培养基放在恒温箱中培养，若出现了菌落，说明培养基被杂菌污染。【课堂小结】【学生活动】1思考倒平板时都有哪些操作是
7、为了避免杂菌污染？锥形瓶的瓶口通过火焰；在酒精灯附近操作；培养皿只露出一个小缝，不全打开；平板冷凝后倒置。2平板划线的过程中有哪些操作是为了避免杂菌污染？灼烧接种环，在火焰旁冷却；将试管口通过火焰；在火焰附近将培养皿打开一条缝隙；每次接种完灼烧接种环。【设计意图】微生物的纯培养过程中，倒平板和平板划线是非常重要的操作，操作的关键就是避免杂菌污染，因此在课堂小结的环节通过提问的方式，加深学生的印象。【教师活动】平板划线的操作过程和注意事项是本节课的重点和难点，在课堂小结环节进行巩固和强化。【课堂检测】1下列关于微生物的实验操作的叙述，正确的是（ C ）A配制细菌培养基过程中，需要在倒平板时调节培
8、养基的pHB配制固体培养基时加入琼脂，其作用是为微生物生长提供碳源C平板划线法接种时，每次划线之前都需要对接种环进行灭菌D实验结束后，使用完的培养基可以直接丢弃2（多选）微生物接种的方法很多，平板划线法是常用的一种。如图是平板划线示意图，划线的顺序为。下列相关叙述错误的是（ AC ）A划线操作时，将蘸有菌种的接种环插入培养基B平板划线后培养微生物时要倒置培养C可以将第区域的划线与第区域的划线相连D在第区域中划线前都要对接种环进行灭菌3有关微生物的分离与培养的叙述，错误的是（ C ）A获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染B倒置平板可防止培养皿盖上的冷凝水滴落造成污染C倒平板时将培养皿的盖拿开，以便于将锥形瓶中的培养基倒入培养皿D检验培养基是否被杂菌污染的最有效方法是将未接种的培养基放在恒温箱中培养 7 / 7
