1、性能， 提出了弯曲梁流变仪(Bending Beam Rheometer ，简称BBR)的小梁弯曲蠕变试验及直接拉伸试验 (DTT)两个试验方法，其中BBR是主要的。 54 SHRP的研究认为，弯曲蠕变试验的极限劲 度温度及蠕变应变速率、值与反映沥青混 合料低温抗裂性能的温度应力试验(TSRST) 的破断温度具有良好的相关关系(如图)， 从而说明BBR试验的价值。 图 SHRP沥青BBM试骏结果与沥青混合料低温性能指标的关系 55 弯曲梁流变仪的结构及基本构成 它由简支桨常皿蠕变装直、保温槽、加载设 施及计算机控制和数据资料采集设备四个单 元组成。 56 最基本的是弯曲蠕变装置； 荷载采用一个
2、小气压泵施加，其技术关键是荷载本身很 小，而且要使加载杆的摩擦力非常小，荷载杆的端部是 半圆头，直接加到试件中央。 保温浴的控温精度为0.1 ,，循环流动使水温均匀， 不冻液采用通常使用的甲醇、乙二醇、乙醇、乙烯及水 的混合物，它必须在-36以下不冻结。 计算机数据采集系统自动采集荷载、变形并自动计算蟠 变劲度S、蠕变速率m。 57 SHRP采用BBR试验用来评价沥青低温 抗裂性能，试验得到两个指标: 1、弯曲蠕变劲度模量S(弯拉模量)，要求 不超过300MPa； 2、蠕变曲线的斜率m，要求不小于0.3。m 值是蠕变劲度S(t)的变化速率，即蠕变曲线 的切线斜率。 58 在我国，将“八五”攻关
3、提出的建议指标10 延 度、 T1.2与BBR试验的弯曲蠕变劲度S相比较可见， 10延度大或T1.2低的沥青BRR试验符合蠕变劲度模 量要求的温度也低，二者之间相关关系较好。 将沥青的延度及T1.2与劲度模量进行比较，不难看 出，沥青蠕变劲度越小，10延度大， T1.2这种双 指标的方法评价沥青的低温抗裂性能是合理的。 59 按照沥青流变学原理,将七种原样沥青弯 曲蠕变劲度模量绘成主曲线汇总于下图。 图原样沥青弯曲蠕变劲度模量主曲线 由此可对各种沥青在广温度域及大时间也围的性质作出推断。 图中曲线越是位于下方的沥青表示低温性能越好。 60 第九节 沥青的低温粘度 沥青在低温时的劲度模量是评价沥
4、青低温抗裂性 能的重要指标。而劲度取决于沥青的粘度。 沥青在低温时是粘弹性体，此时测定得到的粘度 是表观粘度。沥青低温粘度反映沥青在低温条件 下的变形性能，低温粘度越大，说明低温下有较 大的柔性，抗开裂性能好。 61 1. 落柱式粘度计 落柱式粘度计是由R. J. Schmidt和L.E.Santucci 于1963年提出的； 它是利用一个双筒圆柱体，间隙中装人沥青试样， 在荷载作用下由筒徐徐落下，使试样与固定的外筒 间产生剪切变形，通过荷载与变位的测定求解沥青 粘度的装置，其目的是为了测定较低温度(软化点 以下至10左右的范围内)的粘度。 62 落柱式粘度计及试验曲线： 1-LYDT； 2-
5、内筒； 3-外筒； 4-沥青试样；5-砝码； 6- 恒温水浴；7-恒温循环器； 8-放大器；9-X-Y记录仪 测定时，试样设置在 恒温水浴内，砝 码 直接加在LVDT的芯棒 上，X-Y记录仪记录 LVDT的变形曲线，在 时间t内变形为 63 则剪变率D及剪应力S为: 式中: 沥青试样的表观粘度(也称视粘度); D试样的剪应变; S试样的剪应力 试样发生的变形 t荷载作用时间; d1及d2-内外筒的直径; h筒高; g重力加速度。 P荷载，包括硅码及内简、底板、LVDT的芯棒的水中质量之和。 64 采用落柱式粘度计试验比较国产沥青和进口 沥青的性能 采用落柱式粘度计对单家寺稠油 沥青、日本沥青及
6、胜利沥青进行 常温温度域2040的流变性能 试验，如图2-3-31： 在图中双对数坐标上 ，不同荷载下的剪变 率一剪应力的关系即 流变曲线有相当好的 直线关系，即: 65 一般来，PI大的青，C可能会小一些，即感温性好的 青，感性不一定好。 由此可见，对温度较低、沥青表现为非牛顿体时，不同 剪变率和不同剪应力水平时的表观粘度值是不同的，通 常所指沥青在某温度下的粘度为多少，都是指某一定 （1）计算等剪变率(剪切速率)时的表观粘度 （2）计算等剪应力时的表观粘度 （3）计算等剪切功时的等功粘度。 66 2. 滑板式粘度计 滑板式粘度计的铡定原理 非常简单，下图示为两种滑 板式粘度计 a）壳牌公司
7、研究所采用的 滑板式微粘度计(sliding Plate Micro-Viscometer) ， b)弹性恢复流变仪 (Elastic Recovery Rheometer） 67 由于滑板式粘度计可以测定较高粘度的情 况，所以它可用侧定软化点以下至接近0 的沥青以及聚合物改性沥青的粘度，并可 测定其弹性恢复性能。 根据滑板的数目可以做成单板(一固定板及 一滑动板)及双板(一固定板及两块滑动板) 的型式。 68 在单板情况下 若板的面积为A，荷载为P，则剪应力为S=P/A ，若板与板的间隙即试样的厚度为d,滑板移 动的速率为，则沥青的剪变率D= /d。 试验时相对于某一个荷载，记录下时间t内滑
8、 板移动的位移 ，则 = /t，因而 69 哈尔滨建筑大学研制的滑板式粘度 计是双板式的，如图2-3-33： 由三片20mm 30mm6.5mm 的金属片夹注两层2mm的沥青 层，对中间的金属片加荷P形 x是时间的函数，则剪应力S 剪应变Dt及表观粘度 ，按 下式计算: 70 计算时采用等剪切功SD为100J/(sm)时的粘度作为 沥青的表观粘度。 滑板式粘度计结构较为简单，但是影响其测定精度的 因素也很多： 沥青膜厚在(40100) 范围内变化引起粘度变化达 15%； 玻璃板的光洁度、试样中是否有混进杂质微粒、受力 方向有否偏移都能引起大的误差。 71 第十节 沥青的玻璃化温度 对一般的弹性
9、体来说，弹性模量是随温度变化而变化的，且 有两种不同的变化趋势: 随温度的上升弹性模量减小，它被称为能量弹性; 随温度的下降弹性模量增加，它被称为嫡弹性或橡胶弹 性。 用热力学的观点解释，当物体受到拉伸时，拉伸应力与温度 的关系可用下式表示 式中： U、S表示物体内部的活化能及嫡，(u/L)T及（S/L)T表示相应于一 定温度下因拉伸变形L而产生的能量及熵的变化。 72 实验结果表明： 对金属、玻璃之类的“普通的弹性体”，第二项嫡的变化 可以小得忽略不计。于是E= (U/L)T ，为能量弹性， 对这一类弹性体。在外力拉伸时，分子及原子间距、排列 角度产生变化是以能量贮存的形式实现的，当外力去掉
10、后 ，贮存的势能立即释放而使物体恢复原状。 对于橡胶及线状高分子组成的塑料类材料来说，式中第一 项可以小得忽略不计，于是E= -(S/L)T 。在拉伸条 件下， E为正值，绝对温度T永远为正值，因而 (S/L)T为负值。即在同一温度下，嫡因拉伸变形而减 少。 73 具有橡胶弹性的物质并不是永远呈现嫡弹性 的，到了一定温度后，即使受到拉伸，分子 犹如冻结了而不再运动，此时，原子间的间 距与角度发生变化，变成了能量弹性，这种 状态的转变过程称之为玻璃化。 74 沥青的玻璃化的过程 图2-3-36示出了玻璃化的过程，在低温时呈现能量弹性 的物质由于温度上升弹性模量减小，到某一温度时达到 最小值，继续
11、升高时，弹性模量反而增加，呈现嫡弹性 ，这个温度的转折点便称之为玻璃化温度 (GlassTransition Temperature) 75 对沥青这种不具有结晶性的无定形高 分子，它的弹性系数从低温向高温变 化时随之发生这种变化模式(见下图） 从玻璃态变成橡胶 态的过程中存在一 个转换区间，称为 玻璃化温度Tg，它 是具有橡胶弹性的 物质的一个重要的 特征温度，又称之 为第二次转化温度( Second order Transition )。 76 随后由弹性态(嫡弹性)变成粘流态为第一次转化，也称 粘流化温度Tf。在Tg-Tf范围内呈现复杂的粘弹性性 质。 玻璃化温度显示沥青由粘弹态转化为玻
12、璃态的温度， 因而是反映沥青低温性能的重要指标。 玻璃化温度的测定方法甚多，最常用的是改变温度测定 沥青的比容，原理是把沥青装入一个密闭的铝制容器中 ，容器上接一根毛细管，使沥青试样按一定的速度升温 或者降温，读取毛细管中的染色酒精的变位。 77 第十一节沥青低温杭裂性能指标的验证 评价沥青结合料低温抗裂性能的指标有许多，其中有 些指标，如SHAP开发的简支梁弯曲蠕变试验和直接拉 伸试验，物理意义明确，是非常理想的指标。但是试 验技术要求较高，仪器设备需要进口，一时还难以在 国内生产单位推广应用。 “八五”国家科技攻关专题提出的由针人度测定的针 人度指数PI、10低温延度、当量脆点T1.2等，
13、试验 方法简单，与SHRP等先进方法的试验结果有良好的相 关性，被认为是适合于我国国情的评价指标。 78 “七五”和“八五”攻关课题通过对 代表性沥青样品的低温抗裂性能及各 项评价指标的试验研究，并经过实际 取样检验验证，可以得出以下结论: 1、沥青感温性指标针人度指数PI是评价沥青性能指标的核 心。 2、将沥青延度试验的试验温度降低到10 ，拉伸速率为 5cm/min，可以更好地评价不同沥青的路用性能，区分15 0 能量传递复 合染料 PEcy5488红 670 易不敏感减少交叉，成本高 常用的几类荧光染料 52 用化学法将两种不同激发波长的染料结合在一起，在488nm激发 光照射下，通过一
14、个荧光染料被激发后产生的发射波长再激发另一 荧光染料产生荧光信号，从而检测到该特定荧光信号。 能量传递复合染料 53 PE CY5 CY5 CY5 488nm 575nm 670nm 红色荧光 花青苷5 藻红蛋白 能量传递复合染料机制 54 荧光染料与细胞成分的四种结合方式 结构亲和式 嵌入结合 共价键结合 荧光标记抗体特异性结合 免疫荧光标记方法 直标:干扰少,但需购买多种单抗 间标:步骤多,干扰多,不需标记多种抗体 组合标记 （二）免疫荧光标记 55 免疫胶乳颗粒的应用即液相芯片技术是把微小的 乳胶微球分别染成上百种不同的荧光色，把针对 不同检测物的乳胶微球混合后再加入待标本，在 悬液中与
15、微粒进行特异性地结合，经激光照射后 不同待测特产生不同颜色，并可进行定量分析。 因检测速度极快，所以又有“液相芯片”之称 。 三、免疫胶乳颗粒技术的应用 56 微小的乳胶微球分别染成上百 种不同的荧光色（固相芯片是 用探针在芯片上的坐标位置给 基因的特异性编码；而液相芯 片则是用颜色来编码） 57 58 通过对标记不同荧光素分子的检测，实 现FCM对可溶性物质的定量分析 59 四、流式细胞免疫学技术的质量控制 适当的制备方式 处理红细胞 实体组织来源标本用机械法 温度2537，pH7.07.2 （一）单细胞悬液制备的质控 60 温度 pH 染料浓度 固定剂 （二）免疫荧光染色的质控 61 光路
16、与流路校正: 确保激光光路与样品流处于正交状态，减少 变异（CV）。 PMT（光电倍增管）校准: 保证样品检测时仪器处于最佳灵敏度 工作状态。 绝对计数校准: 保证计数的准确性。 Flow-checkFlow-check Flow-setFlow-set Flow-countFlow-count （三）仪器操作的质控 62 同型对照：即免疫荧光标记中的阴性对照，选用相同源性的未标记单 抗作为对照调整和设置电压，以保证特异性。 全程质量控制：与待测标本一起标记和检测，结果达靶值，提示本次 实验结果可靠。 （四）免疫检测的质控 63 第四节 在免疫学检验中的应用 流式细胞术目前已广泛地被应用于免疫
17、学 基础研究和逐步进入临床应用各方面，用流式 细胞仪对细胞表面的抗原成分进行标记分析， 可区别多种细胞的特性，为细胞免疫的研究增 加了有效的手段和帮助。 64 T淋巴细胞及其亚群分析 Th(CD3+CD4+CD8-T); Tc(CD3+CD4-CD8+T) B淋巴细胞及其亚群分析 B1(CD19+CD5+):产生IgM型自身抗体, 参与免疫调节、与自身 免疫病的发生有关 B2(CD19+CD5-):受外来抗原刺激, 产生高亲和性特异性抗体 NK细胞分析 NK(CD3-CD16+CD56+) 一、淋巴细胞及其亚群的分析 65 二、淋巴细胞功能分析 细胞介导细胞毒性试验(死细胞与活细胞比例) 细胞
18、内细胞因子测定 三、淋巴造血系统及白血病免疫分型 对淋巴瘤和白血病进行多色免疫分型 用于选择化疗方案、判断预后及检出微小 残留病变 66 CD4+Th细胞、CD4+/CD8+比例 MDR(+)表示对化疗药物耐药 四、肿瘤耐药基因分析 五、AIDS病检测中的应用 67 HLA-B27可出现在58%97%的强直 性脊椎炎(As) 患者 六、自身免疫病相关HLA抗原分析 68 七、移植免疫中的应用 FCM作为一个强大的技术平台，已应用于多个 领域，其在移植免疫分析中的应用也越来越广 泛。目前移植免疫中的FCM应用主要包括流式 细胞术的交叉配型（Flow cytometry cross- matching, FCXM）和群体反应性抗体（Panel reactive antibody, PRA）检测。 69 思考题 1. 流式细胞仪的分析检测原理是什么？ 2. 流式细胞仪分析中前向散射光、侧向散射光和荧光的检测 意义。 3. 何谓荧光补偿？何谓“液相芯片”技术？ 4. 细胞分选的基本原理。 5. FCM分析中有哪些数据显示方式，如何解读结果及其设 门分析的意义？ 6. 如何进行FCM分析检测样品的制备？ 7. 流式细胞分析前如何验
